Как узнать какой деретикс стоит: Проверка версии DirectX

Как узнать версию DirectX в Windows

&nbsp windows | для начинающих

В этой инструкции для начинающих — о том, как узнать, какой DirectX установлен на компьютере, а если точнее — то узнать, какая версия DirectX используется в настоящее время в вашей Windows системе.

Также в статье приведена дополнительная неочевидная информация, касающаяся версий DirectX в Windows 10, 8 и Windows 7, которая поможет лучше разобраться в том, что к чему в случае если не запускаются какие-то игры или программы, а также в ситуациях, когда версия, которую вы видите при проверке, отличается от той, которую вы ожидаете увидеть.

Примечание: если вы читаете эту инструкцию по причине, что у вас в Windows 7 появляются ошибки, связанные с DirectX 11, при этом по всем признакам установлена именно эта версия, вам может помочь отдельная инструкция: Как исправить ошибки D3D11 и d3d11.dll в Windows 10 и Windows 7.

Узнаем, какой DirectX установлен

Есть простой, описанный в тысяче инструкций, способ узнать установленную в Windows версию DirectX, состоящий из следующих простых шагов (рекомендую после просмотра версии прочитать следующий раздел этой статьи).

  1. Нажать клавиши Win+R на клавиатуре (где Win — клавиша с эмблемой Windows). Или нажать «Пуск» — «Выполнить» (в Windows 10 и 8 — правый клик по «Пуск» — «Выполнить»). 
  2. Ввести команду dxdiag и нажать Enter.

Если по какой-то причине запуск средства диагностики DirectX после этого не произошел, то зайдите в C:\ Windows\ System32 и запустите файл dxdiag.exe оттуда.

Откроется окно «Средство диагностики DirectX» (при первом запуске вам может быть предложено также проверить цифровые подписи драйверов — делайте это на свое усмотрение). В этой утилите, на вкладке «Система» в разделе «Сведения о системе» вы увидите информацию о версии DirectX на компьютере.

Но тут есть одна деталь: на самом деле, значение этого параметра говорит не о том, какой DirectX установлен, а лишь о том, какая из установленных версий библиотек активна и используется при работе с интерфейсом Windows. Обновление: наблюдаю, что начиная с Windows 10 1703 Creators Update в главном окне на вкладке Система dxdiag указывается как раз установленная версия DirectX, т.е. всегда 12. Но при этом не обязательно, что она поддерживается вашей видеокартой или драйверами видеокарты. Поддерживаемую версию DirectX можно увидеть на вкладке Экран, как на скриншоте ниже, или способом, описанным далее.

Про версии DirectX в Windows

Обычно, в Windows присутствуют сразу несколько версий DirectX. Например, в Windows 10 по умолчанию установлен DirectX 12, даже если при использовании описанного выше способа, чтобы узнать версию DirectX, вы видите версию 11.2 или подобную (с версии Windows 10 1703 в главном окне dxdiag всегда отображается версия 12, даже если она не поддерживается).

В описанной ситуации вам не нужно искать, где скачать DirectX 12, а лишь, при условии наличия поддерживаемой видеокарты, добиться, чтобы система использовала новейшую версию библиотек, как это описано здесь: DirectX 12 в Windows 10 (также полезная информация есть в комментариях к указанной статье).

При этом, в оригинальных Windows по умолчанию отсутствуют многие библиотеки DirectX более старых версий — 9, 10, которые почти всегда рано или поздно оказываются востребованы программами и играми, использующими их для работы (в случае их отсутствия пользователь получает сообщения о том, что файлы наподобие d3dx9_43.dll, xinput1_3.dll отсутствуют).

Для того, чтобы скачать библиотеки DirectX этих версий лучше всего использовать веб-установщик DirectX с сайта Microsoft, см. Как скачать DirectX для Windows 10.

При установке DirectX с помощью него:

  • Ваша версия DirectX заменена не будет (в последних Windows ее библиотеки обновляются Центром обновлений).
  • Будут загружены все необходимые отсутствующие библиотеки DirectX, в том числе старых версий для DirectX 9 и 10. А также некоторые библиотеки последних версий.

Подводя итог: на компьютере с Windows желательно иметь все поддерживаемые версии DirectX вплоть до последней, поддерживаемой вашей видеокартой, которую, вы как раз и можете узнать, запустив утилиту dxdiag. Также может быть, что новые драйвера для вашей видеокарты принесут поддержку более новых версий DirectX, а потому и их желательно держать обновленными.

Ну и на всякий случай: если запустить dxdiag по какой-то причине не получается, многие сторонние программы для просмотра сведений о системе, а также для тестирования видеокарты также показывают версию DirectX.

Правда, бывает, отображают именно последнюю установленную версию, а не используемую. А, например, AIDA64 показывает и установленную версию DirectX (в разделе сведений об операционной системе) и поддерживаемую в разделе «DirectX — видео».

А вдруг и это будет интересно:

Как узнать версию DirectX на компьютере — 4 способа

В этой инструкции мы разберем вопрос, с которым сталкиваются некоторые пользователи: как узнать какой установлен DirectX на компьютере. Бывают ситуации, когда пользователю необходимо знать, какая версия DirectX используется в операционной системе Windows, установленной на компьютере.

DirectX — пакет средств разработки, набор API, решающий задачи по программированию в среде Microsoft Windows. Средства разработки DirectX наиболее часто используется при написании компьютерных игр под операционную систему Windows.

Помимо того, что DirectX встроен в операционную систему, Директ Икс часто поставляется вместе с компьютерными играми для установки на ПК вместе с играми. Наиболее последняя версия DirectX делает более совершенным отображение игровой графики на компьютере, позволяет раскрыть все возможности программного обеспечения.

На компьютере установлен DirectX, как узнать версию? Проверить версию DirectX можно средством системы или с помощью стороннего софта.

В общем случае, версии DirectX соответствуют следующим версиям операционной системы Windows:

  • DirectX 9 — Windows XP SP2
  • DirectX 10 — Windows Vista, Windows 7
  • DirectX 11 — Windows 7, Windows 8, Windows 8.1, Windows 10
  • DirectX 12 — Windows 10

Обратите внимание на следующее:

На ПК могут быть установлены разные версии DirectX. Следует обратить внимание на поддержку видеокартой определенной версии DirectX, потому что, если оборудование не поддерживает данную версию средств разработки, Windows не сможет работать с данной версией на компьютере. Операционная система самостоятельно выберет самую последнюю поддерживаемую версию DirectX на компьютере.

Некоторые приложения требуют определенную версию DirectX на компьютере, поэтому пользователю придется самостоятельно скачать DirectX для установки на ПК.

В статье мы рассмотрим 4 способа получения информации об установленной версии DirectX: с помощью системного средства DxDiag, программного обеспечения видеокарты, при помощи сторонних программ (GPU-Z, AIDA64).

Как посмотреть какой DirectX установлен на компьютере средством системы DxDiag

Узнать версию DirectX можно с помощью утилиты DxDiag (DirectX Diagnostic Tool), встроенной в операционную систему Windows. Средство предоставляет подробную информацию, которая может понадобиться для устранения проблем с видео и звуком на компьютере.

Для запуска DxDiag выполните следующие действия:

  1. Нажмите на клавиши клавиатуры «Win» + «R».
  2. В окне «Выполнить» введите команду «dxdiag» (без кавычек), а затем нажмите на кнопку «ОК».

В окне «Средство диагностики DirectX», во вкладке «Система», в разделе «Сведения о системе» напротив пункта «Версия DirectX» отобразится установленная версия DirectX.

В последних версиях Windows 10 DirectX всегда отображается в 12 редакции. На самом деле, оборудование компьютера может не поддерживать данную версию DirectX 12, поэтому я рекомендую посмотреть дополнительные сведения.

Откройте вкладку «Экран», в разделе «Драйверы» вы увидите уровни поддержки функций видеокарты, установленной на компьютере.

Как проверить какой DirectX на компьютере с помощью панели управления видеокарты

Узнать версию DirectX можно с помощью программного обеспечения видеокарты. Я покажу, как это сделать на примере видеокарты производства NVIDIA:

  1. Запустите «Панель управления NVIDIA».
  2. В левой колонке, в самой нижней части нажмите на ссылку «Информация о системе».
  3. В окне «Информация о системе», во вкладке «Дисплей» отобразятся данные о видеоплате.

На этом изображении видно, что в операционной системе версия среды выполнения DirectX 12, версия API Direct3D — 12, уровень возможностей Direct3D — 11. Это означает, что несмотря на поддержку системой новой версии DirectX 12, устаревшая видеокарта сможет полноценно работать только с DirectX 11.

Как узнать какой стоит DirectX в GPU-Z

Бесплатная программа GPU-Z предоставляет подробную информацию о графическом оборудовании, установленном на компьютере. Программа GPU-Z не требует установки на компьютер.

Выполните следующие шаги:

  1. Запустите программу GPU-Z на компьютере.
  2. Откройте вкладку «Advanced», на панели выберите «DirectX» (здесь могут быть разные версии Директ Икс), ознакомьтесь с предоставленной информацией.

Получение информации о DirectX в AIDA64

Программа AIDA64 выдает обширную информацию об оборудовании и программном обеспечении компьютера. В том числе, в AIDA64 вы можете посмотреть версию DirectX своего компьютера.

Пройдите шаги:

  1. Откройте программу AIDA.
  2. Во вкладке «Меню», в разделе «Компьютер» откройте «Суммарная информация». Здесь отобразится установленная версия DirectX (на моем компьютере — DirectX 12).

Для получения информации о поддерживаемой версии DirectX, откройте раздел «DirectX», а затем «DirectX – видео».

В разделе «Свойства Direct3D», напротив пункта «Аппаратная поддержка DirectX», вы увидите поддерживаемую версию DirectX (в моем случае — DirectX 11). Это значит, что видеокарта поддерживает 11 версию DirectX.

Выводы статьи

В случае необходимости, пользователь может узнать версию DirectX, установленную на компьютере в операционной системе Windows. Получить нужную информацию о Директ Икс можно с помощью средства DxDiag, программного обеспечения графической карты, и сторонних программ: GPU-Z, AIDA64.

Похожие публикации:

Как узнать какой directx установлен

Многим пользователям, при установке программного обеспечения, требуется знать, какие драйвера уже установлены для этого или других приложений. Это требуется для того, чтобы не поставить старые дрова вместо новых. Как узнать, какой directx установлен, можно прочитать в данной статье.

Узнать о том, какая версия драйверов DirectX у вас установлена можно двумя способами, каждый из который по своему прост и удобен.

Первый способ узнать какой directx установлен

В винде присутствует средство, с помощью которого можно продиагностировать систему на наличие установленных компонентов DirectX и узнать, какая у них версия. Чтобы воспользоваться этой утилитой, необходимо сделать следующие действия:

  1. Заходим в Пуск – Выполнить, или если у вас 8/8.1, то Win+R.
  2. Вбиваем в строку поиска – dxdiag и подтверждаем выполнение.
  3. Соглашаемся на все всплывающее окно:
  4. После этого у вас появится на экране примерно такое окно:
  5. Как мы видим, последняя строчка укажет нам какая версия сейчас установлена на компьютере. У нас она 11, то есть, на данный момент, она самая новая.
  6. Возможно у вас может стоять версия драйвера от 1.0 до 9.0. Особенностью этих версий является наличие цифрового кода, расшифровку которого вы можете получить из данных следующей таблицы:

Второй способ узнать какой directx установлен

В сети есть очень много программ, которые могут продиагностировать ваш компьютер, показать выкладку компонентов, проанализировать программное обеспечение, установленное у вас на ПК. В частности, для проверки версии directx, есть программа, которая распространяется на бесплатной основе – PC-Wizard. Скачайте и установите программу, а после запуска и сбора информации, выберите пункт «Конфигурация», а потом DirectX и вы увидите версию установленного драйвера. Рассмотрим пример с другого компьютера:

Похожие записи

Как узнать какой DirectX установлен на компьютере

DirectX – пакет библиотек, который позволяет отобразить на мониторе малейшие детали графики в приложениях. Для каждой версии Windows подходит своя версия…

Как узнать версию directx

Мультимедийная технология DirectX используется на многих компьютерах, где установлена операционная система Windows.   Чаще всего, эта версия позволяет проверить обновления на игры, которые адаптированы для ОС. Теперь вам достаточно узнать где…

Как удалить DirectX на Windows 7, 8|8.1, 10

Системные библиотеки DirectX разрабатываются для программирования из-под ОС и для совместимости приложений в этой же системе. Как говорят разработчики из Майкрософта, последние актуальные версии, перед запуском релиза определённой версии…

Как узнать, какой директ установлен на Windows 7

Вначале, давайте определимся, что собой представляет DirectX. Это пакет мультимедийных технологий, необходимых для того, чтобы на компьютере или ноутбуке запускались мультимедийные приложения, а также игры.

Часто, чтобы запускалась какая-нибудь игра, необходимо проводить обновление версии директа.

В большинстве случаев, многие игрушки, установленные на современном устройстве, сопровождаются актуальным пакетом директ, но если она не была обнаружена, то значит, необходимо самостоятельно посмотреть, какая последняя версия была установлена на операционной системе.

Обновление пакета помогает добиться лучшей графики в компьютерных играх, при условии, если на ПК была установлена мощная видеокарта.

То есть, к примеру, игра требует девятую DirectX, а человек установит 10-ую версию, и при этом, видеокарта будет слабая, значимых изменений, увидеть не получится.

Приведенная ниже инструкция для проверки установленной версии DirectX, будет действовать для операционной системы Windows 7.

Использование средства диагностики DirectX

Для начала необходимо нажать на кнопку «Пуск», в нижнем левом углу экрана, и там, в поле «Найти файлы и программы», вбить такой запрос, как dxdiag.

После того, как команда была введена, на клавиатуре необходимо нажать на клавишу «Enter».

Дальше будет открыто специальное окно, в котором человек, без труда во вкладке «Система», сможет увидеть установленную версию DirectX на ПК.

Применение вспомогательного софта

Не всем людям подходят традиционные методы проверки, некоторые любят убеждаться в результате, с помощью специальных утилит. И по этой причине, часто для проверки версии DirectX подходит такая программа, как Astra32.

Этот софт распространяется на бесплатной основе, и на официальном ресурсе, имеется возможность скачать Portable (версия, не требующая установку). После запуска этого софта на своем компьютере, начинается сканирование системы. После того, как сканирование подходит к концу, на главном экране, в самом первом окне, можно узнать установленную DirectX на своем ПК.

Сканирование занимает около минуты, и результат будет выведен в главном окне.

Бывают случаи, когда людям необходим не просмотр установленной версии, а полностью удаление директа со своего ПК.

Полностью удалить этот компонент со своего компьютера можно, с помощью таких актуальных программ, как «DirectX Killer» либо «DirectX Happy Uninstall». Названные утилиты не обладают большим функционалом, но они справляются с главной задачей на все сто процентов.

Теперь, не нужно долго разбираться в том, по какой причине может не запуститься купленная игра с системной ошибкой, достаточно ознакомиться с информацией, представленной в этой статье, чтобы узнать о необходимости использования директа.

Теперь, любой человек может узнать, как правильно проверять, какой директ установлен на рабочем ПК. Помимо операционной системы Windows 7, можно легко узнать директ икс и на других версиях Windows (XP, 10, и так далее).

можно, только версию DirectX это не изменит

Часто новые пользователи персональных компьютеров задаются вопросом о том, как узнать, какой DirectX установлен. Особенно данная проблема волнует тех, кто любит поиграть в разные компьютерные игры. Давайте же разберемся, что это такое, как «это» обнаружить и установить себе.

Что и для чего

Перед тем как говорить о том, как узнать, какой DirectX установлен, необходимо вообще понять, что же это за «Директ» такой. Давайте разбираться вместе.

Для того чтобы компьютер мог взаимодействовать с различными устройствами и своими же «железками», а также с разными приложениями, ему необходимо иметь специальные библиотеки и модули подключения. Они, как правило, имеют расширение.dll. Если такие «вещи» отсутствуют, то можно забыть об исправной работе игры или программы.

DrectX — это своеобразный набор специальных API, которые помогают компьютеру взаимодействовать с теми или иными приложениями. Иными словами, это целый ряд библиотек, которые необходимы для успешной работы компьютера. В последнее время DirectX используется в разработках компьютерных игр, поэтому для геймеров подобная вещь довольно важна и им не менее важно знать, как узнать, какой DirectX установлен на их «машине».

Перед обнаружением

Теперь пришло время поговорить о том, как можно обнаружить на своем компьютере этот самый «Директ». Первым делом нужно знать некоторые моменты, которые помогут вам избавиться от лишних манипуляций при поисках ответа на вопрос, как узнать, какой DirectX установлен на компьютере.

Дело в том, что на каждом компьютере при покупке и первом запуске уже стоит та или иная операционная система. Если более детально начать ее изучать, то можно заметить, что «по умолчанию» на ней уже будет установлен какой-нибудь «Директ». В зависимости от вашей «операционки», конечно же.

Таким образом, если вы хотите знать, как посмотреть, какой DirectX установлен, но не хотите проделывать какие-то действия, постарайтесь запомнить: на современных компьютерах на Windows 7 уже присутствует Директ Икс 9 версии. На «восьмерочке» уже стоит 10 «поколение» с возможностью обновления. Во всех остальных случаях вам необходимо самостоятельно проверять ваши библиотеки.

Начало поиска

Теперь пришло время поговорить о том, как проверить, какой установлен DirectX на компьютере. Делается это буквально за несколько секунд. Если вам хочется «поломать» себе голову, можете поискать специальные онлайн-сервисы, которые умеют показывать сведения о вашем ПК по запросу. Тем же, кому не хочется мудрить, подойдет следующий способ.

Вызовите командную строку. Для этого нажмите Win+R. В появившемся окне заведите команду «dxdiag» и нажмите Ввод. Перед вами откроется окно, в котором будут отражены все сведения о вашем компьютере. Ближе к самому концу списка вы увидите строчку «Установлен DirectX». Напротив данной надписи и будет показана ваша версия «библиотеки».

Также можно еще проще осуществить выход на нужные сведения. Подобный способ подойдет для пользователей «семерочки». Просто откройте меню «Пуск» и в графу поиска забейте «dxdiag». В ответ будет открыта необходимая страница с данными. Теперь, когда вы знаете, как узнать, какой DirectX установлен, пришло время немного поговорить и о том, как «справляться» с данным приложением.

Обновление

Время идет, а с развитием технологий развиваются и подключаемые к компьютеру библиотеки. Таким образом, свои обновления получает и DirectX. Время от времени его нужно обновлять. Но как это сделать?

Осуществляется задача несколькими способами. Первый — это самостоятельный поиск необходимой версии в интернете. Он не очень удобен, так как вы можете «нарваться» на неприятности, а именно, на зашифрованные и спрятанные вирусы. Да и ваша система и данное приложение могут оказаться несовместимы.

Второй метод — это обновление при помощи официального сайта Майкрософт. Для этого зайдите на сайт, найдите DirectX, после чего выберите необходимую вам операционную систему и версию Директа для скачивания. Скачайте и установите, согласно инструкции. После этого перезагрузите компьютер — и вот вы обновили библиотеки компьютера!

Последний, наиболее достоверный метод — это обновление автоматическое, при помощи центра обновления Windows 7. Для этого зайдите в него, начните проверку доступных обновлений, после чего выберите DirectX, если таковой имеется, и дождитесь, пока он обновится. Все, что от вас потребуется, — это подключение к сети интернет. Ну и, конечно же, перезагрузить компьютер после завершения.

Поставил Direct, а толку нет

Иогда может получиться так, что вы установите DirectX на компьютер по запросу приложения и игры, а проблемы с запуском все еще присутствуют. Что делать в данной ситуации?

Многие начинают удалять Директ и заново ставить его, но это не то, что нужно на самом деле. В действительности вам нужно переписать ту библиотеку (она имеет формат.dll), которой у вас не хватает, после чего скачать и «установить» ее на компьютер. Все библиотеки хранятся в папке Windows -> System32.

Найдите в интернете (а лучше на официальном сайте) недостающий файл и скачайте его. Разархивируйте (обычно библиотеки кроются в архивах), после чего «уберите» их в папочку System32 и при надобности перезагрузите компьютер. Все проблемы будут решены.

Часто игры также требуют последнюю версию пакета, иначе они просто не запустятся. Однако как проверить версию DirectX, знает не каждый пользователь и геймер.

Разберем подробнее, как проверить версию DirectX и запустить службу диагностики.

Как проверить версию DirectX самостоятельно

Есть очень простой способ проверки версии мультимедийного пакета, который действует на любой версии ОС Windows:

  1. Нажимаем Пуск — Выполнить…
  2. В новом окне вводим «dxdiag» и нажимаем ОК.
  3. Во вкладке «Система» найдите пункт «Версия DirectX», где и будет указана текущая версия.

Если версия устарела, то необходимо установить более новую, скачав с сайта компании .

Более подробно об установке вы сможете прочесть в нашей статье .

Также вы сможете прочесть более подробно о проверке версии пакета из нашей статьи .

Как запустить средства диагностики DirectX

Средства диагностики DirectX проверяют на неполадки все компоненты мультимедийного пакета. Средства диагностики способны выявить:

  • Неправильную версию DirectX. Это значит, что DirectX необходимо обновить или переустановить.
  • Отсутствие аппаратного ускорения. Многие программы будут работать без ускорения намного медленнее или вообще не будут работать.
  • Неправильно установленные устройства. Это значит, что джойстик или другой аксессуар или устройство не работает с системой ОС из-за неправильных драйверов.
  • Неподписанные драйверы. Некоторые драйвера могут быть несовместимы с последней версией DirectX, что ухудшит их работу в системе ОС Windows.

Чтобы запустить средство диагностики, необходимо:

  1. Нажать Пуск — Выполнить.
  2. Ввести слово «dxdiag» и нажать ОК.
  3. Откроется то же самое окно, что и в инструкции предыдущего раздела. Запустится диагностика для выявления проблем. После того, как диагностика закончится, во вкладках окна можно будет посмотреть всю необходимую информацию о системе.

Также в этих окнах можно будет изменить некоторые данные вроде увеличения аппаратного ускорения. Однако работает данный метод только в Windows XP. В их более новых версиях во вкладках никакие параметры изменить нельзя. А обновление DirectX происходит только через скачивание и установку новой версии.

Играя в современные игры, всем вам хорошо известно, что в качестве графических библиотек используются файлы DirectX. На их основе прорисовываются всие графические объекты в игре, трехмерные полигоны, антиалайзинг, вертексные и пиксельные шейдеры. Также всие задники, то есть фоны, аналогичным образом прорисовываются при помощи DirectX. Каждая видеокарта поддерживает соответствующую версию DirectX, и чем она позднее, тем лучше.

В этой статье я расскажу, как проверить версию DirectX
на любой версии Windows, включая семерку и десятку, а также я затрону тему проверки производительности DirectX в операционной системе, а именно, как он функционирует, все ли режимы он задействует, и использует ли мощности ПК на полную. Если в результате проверки установки DirectX окажется, что некоторые файлы оказались не инсталлированны, возможно, придется доставить недостающие ресурсы на ПК, переустановив один из соответствующих пакетов DirectX.

Как известно, в зависимости от мощности железа, та или иная игра может работать свободно и легко в самом высоком разрешении, может слегка или существенно «тормозить», а может и вовсе не запуститься. Для вас наверняка не будет новостью, если я скажу, что в плане графики все зависит именно от мощности видеоадаптера, в частности от поддерживаемой им версии DirectX.

Если видеокарта поддерживает последнюю версию DirectX (на данный момент, 12-ую), и видеокарта достаточно мощная и производительная, обладает достаточно высокой разрядностью шины и крупным объемом видеопамяти, то насчет графики в играх можете не волноваться — все будет на наивысшем уровне. Если же нет, придется пожертвовать некоторыми эффектами, в результате чего производительность игры также можно будет довести до приемлемого уровня.

Вы можете проверить актуальную версию DirectX в операционной системе, запустив средство инициализации и проверки графической библиотеки. Для этого воспользуемся пресловутой комбинацией Win+R и в мини-форме «Выполнить» введем значение «dxdiag».

В результате такой комбинации запустится средство диагностики ДиректИкс на вашем ПК. Чтобы узнать поддерживаемую версию DirectX, на первой вкладке «Система» взгляните на поле «Версия DirectX» в нижней части формы. Это и будет номер той версии, которая используется на вашем ПК.

Однако, не всё так просто, как может показаться на первый взгляд. В действительности, в этом поле отображается та версия, которая поддерживается операционной системой, но никак не видеокартой. То есть, если вы на не самый мощный компьютер установили Windows 10, то данная программа непременно покажет версию 12, хотя видеокарта может поддерживать максимум 9.1 или 10.

Узнать о том, какая версия библиотеки поддерживается вашим устройством, вы можете в технических характеристиках изделия. Также рекомендуем обновить драйвер вашей видеокарты, ибо вместе с последними обновлениями вы можете привнести в свой игровой процесс более мягкий и гладкий геймплей без фризов и подтормаживаний, а мощность вашей видеокарты может вырасти еще на 5-8%.

Теперь несколько слов о том, как проверить производительность и работоспособность DirectX, воспользовавшись уже представленным вам средством диагностики. Перейдем на вкладку «Экран». Здесь в нижнем текстовом блоке, озаглавленном «Примечания», можно увидеть, есть ли какие-либо неполадки в работе DirectX на вашем ПК. Если, как и в моем случае, здесь у вас красуется надпись «Неполадок не найдено», значит всё в порядке, и в эффективности работы вашего видеоадаптера можете даже не сомневаться.

Аналогичное поле представлено и на вкладке «Звук», так что можете заглянуть и туда. Если же какие-либо проблемы всё же обнаружатся, вполне вероятно, понадобится переустановка ДиректИкс, чем вы можете заняться, как только у вас выдастся свободная минутка перед игрой.

Вот мы и разобрались с особенностями функционирования графической библиотеки DirectИкс. Теперь вы знаете, как проверить, какая версия DirectX установлена на вашем ПК, как узнать о текущем обновлении этого пакета, и как убедиться в его работоспособности и эффективности. Надеюсь, что этот материал будет полезен для вас, и вы получите удовольствие от игры в любимые игровые проекты.

Однозначного ответа где находиться находится directx вы не найдете нигде, поскольку он содержит десятки файлов, которые лежат в различных местах

Если у вас возникли проблемы (система указывает на ошибки файлов), тогда самый оптимальный вариант скачать dxwebsetup.

Этот установщик разместит все необходимые файлы в нужную папку, включая directx 11.

Большинство элементов directx в windows 7, XP и windows 8 находиться в системной папке system 32.

Обычно они нужны для игр, хотя используются для видео и звука.

Там есть все необходимые библиотеки, включая последний директ икс 11 и не только. Даже если у вас windows 7, статья станет хорошим помощником для устранения проблем в играх.

Больше всего получить информации где в компьютере находится directx поможет программа «Everest»

Как удалить directx

Директ икс крепко сидит в системе и полностью его удалить обычным способом (стандартным — программы и компоненты) не получиться.

Для удаления всех компонентов и папок директ икс нужно использовать специальный софт, например утилиты «directx uninstaller.

Такая ситуация возникает из-за того что файлы директ икс в windows 7 находиться в разных местах.

Если при играх возникают ошибки, то как вариант можно файлы удалить выше приведенными программами и установить библиотеки с нуля. Успехов.

Вначале, давайте определимся, что собой представляет DirectX. Это пакет мультимедийных технологий, необходимых для того, чтобы на компьютере или ноутбуке запускались мультимедийные приложения, а также игры.

Часто, чтобы запускалась какая-нибудь игра, необходимо проводить обновление версии директа.

В большинстве случаев, многие игрушки, установленные на современном устройстве, сопровождаются актуальным пакетом директ, но если она не была обнаружена, то значит, необходимо самостоятельно посмотреть, какая последняя версия была установлена на операционной системе.

Обновление пакета помогает добиться лучшей графики в компьютерных играх, при условии, если на ПК была установлена мощная видеокарта.

То есть, к примеру, игра требует девятую DirectX, а человек установит 10-ую версию, и при этом, видеокарта будет слабая, значимых изменений, увидеть не получится.

Приведенная ниже инструкция для проверки установленной версии DirectX, будет действовать для операционной системы Windows 7.

Использование средства диагностики DirectX

Для начала необходимо нажать на кнопку «Пуск», в нижнем левом углу экрана, и там, в поле «Найти файлы и программы», вбить такой запрос, как dxdiag.

После того, как команда была введена, на клавиатуре необходимо нажать на клавишу «Enter».

Дальше будет открыто специальное окно, в котором человек, без труда во вкладке «Система», сможет увидеть установленную версию DirectX на ПК.

Применение вспомогательного софта

Не всем людям подходят традиционные методы проверки, некоторые любят убеждаться в результате, с помощью специальных утилит. И по этой причине, часто для проверки версии DirectX подходит такая программа, как Astra32.

Этот софт распространяется на бесплатной основе, и на официальном ресурсе, имеется возможность скачать Portable (версия, не требующая установку). После запуска этого софта на своем компьютере, начинается сканирование системы. После того, как сканирование подходит к концу, на главном экране, в самом первом окне, можно узнать установленную DirectX на своем ПК.

Сканирование занимает около минуты, и результат будет выведен в главном окне.

Бывают случаи, когда людям необходим не просмотр установленной версии, а полностью удаление директа со своего ПК.

Полностью удалить этот компонент со своего компьютера можно, с помощью таких актуальных программ, как «DirectX Killer» либо «DirectX Happy Uninstall». Названные утилиты не обладают большим функционалом, но они справляются с главной задачей на все сто процентов.

Теперь, не нужно долго разбираться в том, по какой причине может не запуститься купленная игра с системной ошибкой, достаточно ознакомиться с информацией, представленной в этой статье, чтобы узнать о необходимости использования директа.

Теперь, любой человек может узнать, как правильно проверять, какой директ установлен на рабочем ПК. Помимо операционной системы Windows 7, можно легко узнать директ икс и на других версиях Windows (XP, 10, и так далее).

Как узнать какая directx установлена в Windows 10, Windows 7, Windows 8.1

Как узнать какая directx установлена в Windows 10, Windows 7, Windows 8. 1-01

Всем привет сегодня рассмотрим как узнать какая directx установлена в Windows 10, Windows 7, Windows 8.1. Данный метод полностью универсален и не важно в какой версиии или разрядности Windows вы будите его использовать. DirectX это ряд технологий (набор API), благодаря которым компьютеры с операционными системами Windows становятся идеальной средой для запуска и отображения приложений, богатых элементами мультимедиа, такими как цветная графика, видео, трехмерная анимация и стереозвук. Наиболее широко используется при написании компьютерных игр. С каждой новой версией DirectX отображение видеографики становится более реалистичной и правдоподобной

как узнать версию directx в windows встроенными средствами

Для того чтобы узнать directx установленный на компьютере нажмите Win+r и введите dxdiag

Как узнать какая directx установлена в Windows 10, Windows 7, Windows 8.1-02

У вас откроется окно средство диагностики DirectX и на вкладке Система вы увидите какая версия DirectX установлена, в моем случае это 11 версия.

Как узнать какая directx установлена в Windows 10, Windows 7, Windows 8.1-03

как узнать какая directx установлена с помощью Astra32

Заходим на сайт astra32.com/ru/download.htm и скачиваем Portable версию astra32

Как узнать какая directx установлена в Windows 10, Windows 7, Windows 8.1-04

Запускаем

Как узнать какая directx установлена в Windows 10, Windows 7, Windows 8.1-05

Продолжить

Как узнать какая directx установлена в Windows 10, Windows 7, Windows 8.1-06

Начнется сканирование системы

Как узнать какая directx установлена в Windows 10, Windows 7, Windows 8.1-07

В открывшемся окне программы, перейдите в меню «Программы» — «Windows». Здесь вы можете увидеть версию DirectX

Как узнать какая directx установлена в Windows 10, Windows 7, Windows 8.1-09

Вот так вот просто вы узнали как узнать какой стоит directx в Windows.

Материал сайта pyatilistnik. org

Проверка версии DirectX: пошаговое руководство

DirectX – набор инструментов, который был разработан для эффективной работы мультимедиа в Microsoft Windows. Грубо говоря, компонент ПО, задачей которого является «организация» всех аппаратных элементов системы. Чаще всего используется в процессе написания игр, поскольку отвечает за обработку графики. Чтобы система при этом работала корректно, от видеокарты требуется обратная аппаратная поддержка DirectX.

Данный компонент, а также его исполняемые библиотеки обновляются в процессе инсталляции игр. Но как самому узнать версию directx и обновить ее, если потребуется?

Какая версия DirectX должна стоять у вас?

Каждая версия Windows поддерживает свой DirectX:

  • Для Windows XP это DX9;
  • для Vista – DX10;
  • для Win7 и 8/8,1 – DX11.

Релиз новой «десятой» версии ОС от Microsoft принес нам новую 12 версию, которая, по словам разработчиков, наконец раскроет весь потенциал многоядерных процессоров, сделав связку ЦП-видеокарта в разы производительнее.

Определение вашей версии

Чтобы узнать, что именно установлено у вас, откройте «Пуск» и найдите команду «Выполнить». Это актуально для всех версий Windows, начиная с XP.

Вводим фразу dxdiag, или ищем этот пункт меню среди предложенных. Поиск все-таки быстрее. Жмем Enter и дожидаемся сбора статистических данных по вашей системе в целом и ее отдельным компонентам в частности.

Нас интересует вкладка «система». Смотрим в самый низ и обнаруживаем, что установлена 11 версия DirectX (пример).

Обновление компонентов DX

Если вам кажется, что версия ПО устарела, и игры требуют более свежий пакет исполняемых библиотек, обновите их на официальном сайте Microsoft по соответствующей ссылке (актуальна для 11 версии).

Затем удостоверьтесь, что ваша видеокарта поддерживает данную версию ПО. Если она способна работать лишь с DX9 и DX10, никакое обновление не даст результата. Аппаратная поддержка важнее программной, так что имейте это ввиду.

О спецификациях видеокарты можно узнать в интернете.

Белки Atg8 млекопитающих и фактор аутофагии IRGM контролируют mTOR и TFEB в регуляторном узле, критическом для ответов на патогены.

  • 1.

    Мидзусима, Н., Йошимори, Т. и Осуми, Ю. Роль белков Atg в формировании аутофагосом. Анну. Rev. Cell Dev. Биол. 27 , 107–132 (2011).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 2.

    Мидзусима, Н., Левин, Б., Куэрво, А. М. и Клионски, Д. Дж.Аутофагия борется с болезнями посредством клеточного самопереваривания. Природа 451 , 1069–1075 (2008).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 3.

    Левин Б. и Кремер Г. Биологические функции генов аутофагии: перспектива болезни. Cell 176 , 11–42 (2019).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 4.

    Сингх, С. Б., Дэвис, А. С., Тейлор, Г. А. и Деретик, В. IRGM человека вызывает аутофагию для уничтожения внутриклеточных микобактерий. Наука 313 , 1438–1441 (2006).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 5.

    Консорциум Wellcome Trust Case Control. Полногеномное ассоциативное исследование 14 000 случаев семи распространенных заболеваний и 3000 общих контрольных заболеваний. Природа 447 , 661–678 (2007).

    Google Scholar

  • 6.

    Parkes, M. et al. Варианты последовательностей в гене аутофагии IRGM и множестве других реплицирующихся локусов вносят вклад в восприимчивость к болезни Крона. Nat. Genet. 39 , 830–832 (2007).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 7.

    Деретич В., Сайто Т. и Акира С. Аутофагия при инфекции, воспалении и иммунитете. Nat. Rev. Immunol. 13 , 722–737 (2013).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 8.

    Bekpen, C. et al. Интерферон-индуцируемые ГТФазы p47 (IRG) у позвоночных: потеря клеточного автономного механизма резистентности в человеческой линии. Genome Biol. 6 , R92 (2005).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 9.

    Bekpen, C. et al. Смерть и воскрешение человеческого гена IRGM. PLoS Genet. 5 , e1000403 (2009).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 10.

    Митчелл, Г. и Исберг, Р. Р. Врожденный иммунитет к внутриклеточным патогенам: баланс между устранением микробов и воспалением. Клеточный микроб-хозяин 22 , 166–175 (2017).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 11.

    Gutierrez, M. G. et al. Аутофагия — это защитный механизм, препятствующий выживаемости БЦЖ и Mycobacterium tuberculosis в инфицированных макрофагах. Ячейка 119 , 753–766 (2004).

    CAS

    Google Scholar

  • 12.

    Singh, S. B. et al. IRGM человека регулирует аутофагию и функции клеточно-автономного иммунитета через митохондрии. Nat. Cell Biol. 12 , 1154–1165 (2010).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 13.

    Чаухан С., Манделл М. и Деретич В. IRGM управляет основным механизмом аутофагии для проведения противомикробной защиты. Мол. Ячейка 58 , 507–521 (2015).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 14.

    Kumar, S. et al. Механизм рекрутирования Stx17 в аутофагосомы через IRGM и белки Atg8 млекопитающих. J. Cell Biol. 217 , 997–1013 (2018).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 15.

    Gregoire, I. P. et al. IRGM — обычная мишень для РНК-вирусов, разрушающих сеть аутофагии. PLoS Pathog. 7 , e1002422 (2011).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 16.

    Itakura, E., Kishi-Itakura, C. & Mizushima, N. Синтаксин 17 SNARE, закрепленный на хвосте шпильки, нацелен на аутофагосомы для слияния с эндосомами / лизосомами. Ячейка 151 , 1256–1269 (2012).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 17.

    Weidberg, H. et al. Подсемейства LC3 и GATE-16 / GABARAP оба существенны, но действуют по-разному в биогенезе аутофагосом. EMBO J. 29 , 1792–1802 (2010).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 18.

    Nguyen, T. N. et al. Белки LC3 / GABARAP семейства Atg8 являются критическими для слияния аутофагосом и лизосом, но не для образования аутофагосом во время митофагии PINK1 / Parkin и голодания. J. Cell Biol. 215 , 857–874 (2016).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 19.

    Settembre, C. et al. TFEB связывает аутофагию с лизосомным биогенезом. Наука 332 , 1429–1433 (2011).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 20.

    Sardiello, M. et al. Генная сеть, регулирующая биогенез и функцию лизосом. Наука 325 , 473–477 (2009).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 21.

    Пуэртоллано Р., Фергюсон С. М., Бругаролас Дж. И Баллабио А. Сложная взаимосвязь между фосфорилированием фактора транскрипции TFEB и субклеточной локализацией. EMBO J. 37 , e98804 (2018).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 22.

    Наполитано, Г. и Баллабио, А. Краткий обзор TFEB. J. Cell Sci. 129 , 2475–2481 (2016).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 23.

    Брэди, О. А., Мартина, Дж. А. и Пуэртоллано, Р. Новые роли TFEB в иммунном ответе и воспалении. Аутофагия 14 , 181–189 (2018).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 24.

    Settembre, C. et al. TFEB контролирует клеточный липидный метаболизм с помощью петли ауторегуляции, вызванной голоданием. Nat. Cell Biol. 15 , 647–658 (2013).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 25.

    Roczniak-Ferguson, A. et al. Фактор транскрипции TFEB связывает передачу сигналов mTORC1 с транскрипционным контролем гомеостаза лизосом. Sci. Сигнал. 5 , ra42 (2012).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 26.

    Settembre, C. et al. Механизм передачи сигналов от лизосомы к ядру воспринимает и регулирует лизосомы через mTOR и TFEB. EMBO J. 31 , 1095–1108 (2012).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 27.

    Medina, D. L. et al. Передача сигналов лизосомным кальцием регулирует аутофагию через кальциневрин и TFEB. Nat. Cell Biol. 17 , 288–299 (2015).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 28.

    Medina, D. L. et al. Активация транскрипции лизосомного экзоцитоза способствует клеточному клиренсу. Dev. Cell 21 , 421–430 (2011).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 29.

    Nnah, I. C. et al. Эндоцитоз, управляемый TFEB, координирует передачу сигналов MTORC1 и аутофагию. Аутофагия 15 , 151–164 (2019).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 30.

    Mansueto, G. et al. Фактор транскрипции EB контролирует метаболическую гибкость во время упражнений. Cell Metab. 25 , 182–196 (2017).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 31.

    Perera, R.M. et al. Транскрипционный контроль функции аутофагии и лизосом управляет метаболизмом рака поджелудочной железы. Природа 524 , 361–365 (2015).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 32.

    Кэмпбелл, Г. Р., Рават, П., Брукман, Р. С. и Спектор, С. А. Вирус иммунодефицита человека типа 1 Nef подавляет аутофагию посредством секвестрации транскрипционного фактора EB. PLoS Pathog. 11 , e1005018 (2015).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 33.

    Gray, M. A. et al. Фагоцитоз усиливает лизосомные и бактерицидные свойства за счет активации фактора транскрипции TFEB. Curr. Биол. 26 , 1955–1964 (2016).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 34.

    Jia, J. et al. Галектин-3 координирует клеточную систему для восстановления и удаления лизосом. Dev. Ячейка 52 , 69–87 e68 (2020).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 35.

    Manzanillo, P. S., Shiloh, M. U., Portnoy, D. A. & Cox, J. S. Mycobacterium tuberculosis активирует ДНК-зависимый путь цитозольного наблюдения в макрофагах.Клеточный микроб-хозяин 11 , 469–480 (2012).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 36.

    Collazo, C. M. et al. Инактивация LRG-47 и IRG-47 выявляет семейство генов, индуцируемых гамма-интерфероном, которые играют важную патоген-специфическую роль в устойчивости к инфекции. J. Exp. Med. 194 , 181–188 (2001).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 37.

    NCBI. Домен неизвестной функции (DUF3371). База данных сохраненных доменов https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/cddsrv.cgi?uid=pfam11851 (2019).

  • 38.

    Zoncu, R. et al. mTORC1 воспринимает лизосомальные аминокислоты по механизму вывернутого наизнанку, который требует вакуолярной H + -АТФазы. Наука 334 , 678–683 (2011).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 39.

    Иноки, К., Zhu, T. & Guan, K. L. TSC2 опосредует энергетический ответ клеток, контролируя рост и выживание клеток. Cell 115 , 577–590 (2003).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 40.

    Abu-Remaileh, M. et al. Лизосомная метаболомика выявляет V-ATPase- и mTOR-зависимую регуляцию оттока аминокислот из лизосом. Наука 358 , 807–813 (2017).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 41.

    Берендс К., Сова М. Э., Гайги С. П. и Харпер Дж. У. Сетевая организация системы аутофагии человека. Природа 466 , 68–76 (2010).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 42.

    Nezich, C. L., Wang, C., Fogel, A. I. & Youle, R. J. Факторы транскрипции MiT / TFE активируются во время митофагии ниже Паркина и Atg5. J. Cell Biol. 210 , 435–450 (2015).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 43.

    Gu, Y. et al. Белки Atg8 млекопитающих регулируют биогенез лизосом и автолизосом через SNARE. EMBO J. 38 , e101994 (2019).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 44.

    Kumar, S. et al. Фосфорилирование синтаксина 17 с помощью TBK1 контролирует инициацию аутофагии. Dev. Ячейка 49 , 130–144.e6 (2019).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 45.

    Бар-Пелед, Л., Швейцер, Л. Д., Зонку, Р. и Сабатини, Д. М. Ragulator — это GEF для Rag GTPases, которые сигнализируют об уровнях аминокислот на mTORC1. Ячейка 150 , 1196–1208 (2012).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 46.

    Джексон, К. Л. и Казанова, Дж. Э. Включение ARF: семейство Sec7 факторов обмена гуанин-нуклеотид. Тенденции Cell. Биол. 10 , 60–67 (2000).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 47.

    Jia, J. et al. Галектины контролируют mTOR в ответ на повреждение эндомембраны. Мол. Ячейка 70 , 120–135.e8 (2018).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 48.

    Castellano, B.M. et al. Лизосомный холестерин активирует mTORC1 через сигнальный комплекс SLC38A9 – Niemann – Pick C1. Наука 355 , 1306–1311 (2017).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 49.

    Chauhan, S. et al. TRIMs и galectins глобально взаимодействуют, а TRIM16 и Galectin-3 совместно направляют аутофагию в гомеостазе повреждения эндомембран. Dev. Cell 39 , 13–27 (2016).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 50.

    Huett, A., McCarroll, S. A., Daly, M. J. & Xavier, R.J. На уровне: функция гена IRGM — это все о экспрессии. Аутофагия 5 , 96–99 (2009).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 51.

    Брест П. и др. Синонимичный вариант IRGM изменяет сайт связывания для miR-196 и вызывает нарушение регуляции IRGM-зависимой ксенофагии при болезни Крона. Nat. Genet. 43 , 242–245 (2011).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 52.

    McCarroll, S. A. et al. Полиморфизм делеции перед IRGM связан с измененной экспрессией IRGM и болезнью Крона. Nat. Genet. 40 , 1107–1112 (2008).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 53.

    Carvalho, F. A. et al. Инвазивные при болезни Крона Escherichia coli колонизируют и вызывают сильное воспаление кишечника у трансгенных мышей, экспрессирующих CEACAM человека. J. Exp. Med. 206 , 2179–2189 (2009).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 54.

    Chowers, M. Y. et al. Оптимальная инфекционность вируса иммунодефицита человека типа 1 in vitro требует наличия интактного гена nef. J. Virol. 68 , 2906–2914 (1994).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 55.

    Huang, R. et al. Деацетилирование ядерного LC3 запускает аутофагию при голодании. Мол. Ячейка 57 , 456–466 (2015).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 56.

    Иноки, К., Ким, Дж. И Гуан, К. Л. AMPK и mTOR в клеточном энергетическом гомеостазе и мишенях для лекарств. Анну. Ред.Pharmacol. Toxicol. 52 , 381–400 (2012).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 57.

    О’Нил, Л. А., Киштон, Р. Дж. И Ратмелл, Дж. Руководство по иммунометаболизму для иммунологов. Nat. Rev. Immunol. 16 , 553–565 (2016).

    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 58.

    Faeste, C. K. et al. Характеристика потенциальных новых аллергенов у паразита рыб Anisakis simplex.EuPA Open Proteom. 4 , 140–155 (2014).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 59.

    Faeste, C. K. et al. Разработка методов жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектрометрии для количественного определения белков Anisakis simplex у рыб. J. Chromatogr. А 1432 , 58–72 (2016).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 60.

    Анонсен, Дж. Х. и др. Новые белковые субстраты системы модификации фосфоформ у Neisseria gonorrhoeae и их связь с О-связанным гликозилированием белков. Заразить. Иммун. 80 , 22–30 (2012).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 61.

    Olivetta, E. & Federico, M. ВИЧ-1 Nef защищает макрофаги, полученные из моноцитов человека, от апоптоза, индуцированного ВИЧ-1. Exp. Cell Res. 312 , 890–900 (2006).

    CAS
    PubMed

    Google Scholar

  • 62.

    Aiken, C. & Trono, D. Nef стимулирует синтез провирусной ДНК вируса иммунодефицита человека 1 типа. J. Virol. 69 , 5048–5056 (1995).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 63.

    Aiken, C. Псевдотипирование вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) гликопротеином вируса везикулярного стоматита нацелено на проникновение ВИЧ-1 в эндоцитарный путь и подавляет как потребность в Nef, так и чувствительность к циклоспорину А. .J. Virol. 71 , 5871–5877 (1997).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • 64.

    Робинсон, М. Д., Маккарти, Д. Дж. И Смит, Г. К. edgeR: пакет Bioconductor для анализа дифференциальной экспрессии цифровых данных экспрессии генов. Биоинформатика 26 , 139–140 (2010).

    CAS
    PubMed
    PubMed Central

    Google Scholar

  • Старая газета может дать свежий взгляд на болезнь »Albuquerque Journal

    ………. ………. ………. ………. ……….. ……… ………. ………. ………. ……….. ……… ………. ………. ………. ……….. ……… ………. ……….

    Copyright © 2020 Albuquerque Journal

    Два ученых из Университета Нью-Мексико стряхнули пыль с десятилетней давности. , неопубликованный исследовательский документ, потому что они думают, что он может объяснить, как определенные лекарства помогли лечить пациентов с COVID-19.

    Ученые Грэм Тимминс и Войо Деретич считают, что их старая работа, посвященная изучению того, что помогло пациентам с муковисцидозом, может дать представление об эффективных методах лечения нового коронавируса.

    После нового названия и нового введения их старая статья была опубликована две недели назад на bioRxiv, онлайн-ресурсе для биологических исследований, который не публиковался в рецензируемом научном журнале.

    ………………………………………… …………….

    Хлорохин, гидроксихлорохин и азитромицин интенсивно изучаются как возможные методы лечения пациентов с COVID-19, хотя эксперты в области здравоохранения заявили, что эти препараты еще не доказаны.

    Госпиталь УНМ входит в число тех, кто начал клинические испытания с использованием гидроксихлорохина и азитромицина.

    «Когда месяц назад хлорохин попал в прессу, (я) увидел, как старая лента прокручивается в моей голове, и я подумал:« Вот как это, вероятно, работает »», — сказал Деретич, председатель Департамента молекулярной генетики и генетики. Микробиология.

    С 2002 по 2010 годы Тимминс и Деретич сотрудничали в нескольких исследовательских проектах, посвященных лечению пациентов с муковисцидозом, хроническим заболеванием, поражающим легкие.

    В одной статье, которая на тот момент не была опубликована, было рассмотрено, как азитромицин и ципрофлоксацин помогают пациентам.

    Лекарства вводились в дозах, которые не убивали бактериальную инфекцию у пациентов с муковисцидозом, но пациенты чувствовали себя лучше, сказал Тимминс, профессор фармацевтического колледжа UNM, специализирующийся на разработке средств диагностики и лечения респираторных заболеваний. инфекции.

    Вопрос, на который они пытались ответить, заключался в том, как действуют лекарства.

    Они пришли к выводу, что лекарства были эффективны, потому что они были слабыми основаниями — противоположностью кислоты. Из-за своего уровня pH препараты нейтрализовали воспаленные клетки легких, которые стали кислыми. После 2010 года они сосредоточились на различных исследованиях и так и не опубликовали свою статью.

    Но не удалили. И теперь они думают, что исследование может объяснить, почему такие препараты, как гидроксихлорохин и азитромицин, обычно используемые против паразитов и бактерий, могут быть эффективными против вируса.

    «Итак, эта газета просто лежала на наших компьютерах», — сказал Тимминс. «Но как только мы начали слышать о хлорохине и гидроксихлорохине, и многие люди стали спрашивать…« Как они работают? »Идея заключалась в том,« ну, мы могли бы предоставить эту информацию. »Вам не нужны анти- вирусная активность. Вы просто модулируете воспаление ».

    Когда пациент заражается коронавирусом, иммунная система организма пытается атаковать вирус, что приводит к воспалению, которое в тяжелых случаях может привести к органной недостаточности, говорится в сообщении UNM.

    Тимминс и Деретич выдвигают гипотезу о том, что хлорохин и гидроксихлорохин оказались успешными у некоторых пациентов с COVID-19, нейтрализуя воспаление в легких.

    «Мы не сразу вытащили это из шляпы», — сказал Деретич. «У нас были … данные из прошлого, и не потребовалось много гения, чтобы понять, что, возможно, это поможет с COVID».

    Они сказали, что неясно, как и могут ли врачи получить пользу от своей работы.

    «Дело не в наших исследованиях.Речь идет о серьезной болезни, которая поражает весь мир на многих уровнях, это экономика, это приостановка жизни каждого человека. Мы бы не выпустили это, если бы не думали, что это поможет », — сказал Деретич. «Нам просто нужно было поделиться им со всеми, чтобы люди могли взглянуть на это и принять все, чего оно стоит».

    Указатель Sandoval — Новости животных

    отпечатки домашних животных Лало:

    Лало любит получать фотографии ваших питомцев и животных для печати на указателе.
    Отправьте их «Лало» по адресу: [email protected]
    Или отправьте распечатку по почте: Указатель, P.O. Box 889 Placitas, NM 87043


    «Сэнди Офелия» со своим товарищем по играм «Симба».
    Владелец: Нэнси Стивенс. Фото Анны Новак, Пласитас.

    С Хеллоуином, «Луна!» —Ивонн Марреро и Давито Хаммак


    Койот убивает шнауцера

    —Ти Белкнап

    Питер Деретич хочет почтить память своей собаки, напоминая людям, что нужно защищать своих домашних животных и маленьких детей от койотов.В прошлом месяце койот, проживающий в районе Ла-Меса, нашел способ открыть ворота на обнесенный стеной задний двор Деретика и скрылся со своим миниатюрным шнауцером — «Ремусом». Теперь у него остался только «Ромул». Тезки Ромул и Рем были братьями-близнецами и центральными персонажами мифа об основании Рима. В отличие от мифа, нет никаких сомнений в том, как Ремус встретил свою кончину, основываясь на следах и явно похожих на койотов доказательствах, оставшихся с останками. Питер не хотел вдаваться в подробности.

    Он сказал, что Ремус был отличным псом, очень милым и храбрым, и Ромул и остальные члены его семьи сильно скучают по нему. Питер говорит, что ему нравится находиться рядом с дикой природой, и он не намерен мстить, кроме как попытаться исключить домашних животных из рациона койотов. Он сказал: «Я слышал, что у них не хватает еды из-за засухи и потери среды обитания. Может быть, я был неосторожен, зная, что койоты были по соседству. Они очень терпеливы и ждут возможности нанести удар.


    Не койоты — некоторые говорят, что еноты

    — Джефф Рэдфорд, Комментарий Корралеса

    Что нужно сделать, чтобы изменить реакцию Корралеса на хищничество койотов? Это вопрос, который задают не менее десяти лет. На заседании сельсовета 22 октября снова поступили новые вопросы и ответы.

    Двадцатипятилетний житель Корралеса Кен Генко утверждал, что популяция койотов не вышла из-под контроля, по крайней мере, ненадолго, и что, если бы койоты были уничтожены здесь, жители деревни были бы наводнены грызунами.Он призвал членов совета использовать науку, а не эмоции и анекдотические свидетельства, чтобы установить политику деревни в отношении койотов.

    Эл Найт, стойкий сторонник большего или «лучшего» контроля над койотами, сказал, что общественные дебаты должны игнорировать призывы уничтожить всех койотов и игнорировать призывы, что койотов вообще нельзя контролировать. Койоты Корралеса не являются вашими обычными существами, сказал он: «Они урбанизированы, привыкли, они не боятся людей, они не боятся собак, они очень легко приспосабливаются, они могут прыгать через заборы и копать под курятниками.

    «Эти проблемные койоты почти разрушают образ жизни Корралеса», — утверждал Найт.

    Роджер Финзел сказал членам совета, что койоты являются важной частью экологии Корралеса, управляя грызунами, скунсами, белками и другими неприятными существами.

    Он вспомнил, что несколько лет назад один сельский житель сообщил, что его коз убили койоты. «Но дело в том, что коз убили его собственные собаки, потому что мои соседи стащили собак с одной из коз.Кажется, во всем винят койотов ».

    Финзель сказал, что в его районе еноты едят кур, а не койотов.

    Джо Боб Нуньес объяснил: «Я не имею ничего против койотов, кроме тех случаев, когда они держат во рту мою собаку или мою курицу. Тогда у нас есть проблема. Я бы хотел, чтобы мы могли сосуществовать с койотами, но мне жаль, но мы не можем ».

    Шерри Уайт сказала, что каждый день на ее территории живет пять койотов, которые используют поля ее соседей «для отдыха и расслабления.Их нельзя обмануть, хорошо? Я действительно умею дедовщину. Уайт сказал, что если в них бросают камни, они бегут вперед, «чтобы посмотреть, какое мясо им кто-то бросил».

    Проблема не обязательно в койотах, утверждала она. Мэрилин Шедла предложила убрать и уничтожить обитателей логов койотов, которые являются домовыми тварями. Ее сын, биолог по дикой природе Уильям Шедла, сказал, что за последние годы он увидел здесь рост койотов. «Я подозреваю, что это в большей степени из-за сжатия со стороны окружающих сообществ, чем что-либо еще.”

    Он предсказал, что здесь популяции койотов начнут ограничивать болезни, а не только нехватка пищи.

    Сьюзан Вайс сказала, что реализация Комплексного плана управления койотами Corrales 2001 года развивалась с течением времени, с меньшим упором на убийство и больше на преследование. «Дух и буква плана управления реализовались», — заявила она. «Офицеры зооконтроля и деревня могут очень гордиться этим достижением. Еще большей гордости Корралеса было бы достойно участие большего количества жителей … чтобы гуманно управлять поведением нескольких койотов, которые иногда охотятся на домашних животных.”

    Алана МакГраттан сказала, что она сохранила почти семь акров своей семейной фермы за счет природоохранного сервитута и продолжает разводить сельскохозяйственных животных. Она отметила, что на протяжении многих лет «хищниками, похищавшими ее сельскохозяйственных животных, в каждом отдельном случае были еноты.

    «У нас в этой деревне очень, очень серьезная проблема с енотами», — подчеркнул МакГраттан. «Я убежден, из рассказов, которые я слышу о хищниках на их цыплятах или птицах, или что-то еще, что это не койоты, это еноты.”

    Она сказала, что изучила помет койотов, оставленных на ее ранчо, и обнаружила, что они в основном едят кузнечиков и ягоды. Она сказала, что никогда не теряла новорожденного теленка из-за койота.

    Эта статья частично перепечатана из комментария Corrales от 9 ноября 2013 г.

    Afrodita Deretic от удаленных подключений Хорватия

    Удаленная работа сейчас популярна как никогда. Цифровые кочевники делают это, компании отправляют своих сотрудников на работу из разных уголков страны или даже мира, а творческие работники начинают верить, что их работа не ограничивается одним крошечным столом в фиксированном месте.Мир официально сузился для предпринимателей, и творческое сообщество явно не могло быть более довольным этим сдвигом. Благодаря тому, что программы удаленной работы появляются по всему миру и максимально используют нашу совместную любовь к сетям, бизнесу и путешествиям, проект Desk Life пообщался с Афродитой Деретич, соучредителем Remote Connections в Хорватии, чтобы узнать, почему она начала свой бизнес и как он создает значимый опыт для своих участников.

    Привет, Афродита! Вы соучредили Remote Connections Croatia, познакомьте нас с этим захватывающим опытом!

    Remote Connections — это опыт путешествий по Хорватии для личного и профессионального роста.Мы курируем поездки в различные города Хорватии для выбранных нами участников, от работающих и путешествующих людей до удаленных сотрудников и добровольцев из числа местных жителей, которые хотят развивать свою любовь к путешествиям, глобальному сообществу, человеческим связям и значимым событиям, при этом развивая свои личные качества. развитие и карьера.

    Наша миссия — выйти за пределы границ и создать глобальную нацию выдающихся граждан, которые в будущем станут сторонниками движения за преобразование рабочей среды, человеческих связей и качества жизни с состраданием и свободой.
    Мы объединяем граждан мира в одном потрясающем месте для незабываемого личного и профессионального роста и значимых воспоминаний.

    Почему вы решили создать программу?

    Нам действительно нравится называть это опытом, который мы создали, потому что мы определили уникальную потребность среди тех, кто не зависит от местоположения, а также тех, кто хочет им быть. Нужна связь. Мы действительно чувствуем, что, несмотря на то, что независимость от местоположения невероятна, связь — это то, что делает опыт намного более значимым.Исследования показали, что людям нужна связь для самореализации и роста, поэтому мы стремимся соединить наших участников с самими собой, единомышленниками и окружающей средой для получения полноценного опыта.

    Исследование также показало, что к 2020 году половина мировой рабочей силы будет работать удаленно. Поскольку люди со всего мира стремятся к более глобальному образу жизни, мы чувствуем, что чрезвычайно важно обеспечить значимый опыт, в котором эти люди могут общаться и стать частью растущего мирового сообщества.

    Что побудило вас выбрать Хорватию в качестве места проживания?

    В ближайшие несколько лет мы планируем расширяться по всей Восточной Европе, а позже и по всему миру. Однако пока мы выбрали Хорватию по нескольким причинам:

    Первое, Хорватия просто потрясающая. В нем действительно есть все, что мы искали в месте назначения. Он предлагает отдых с его потрясающими пляжами и чистой голубой водой, он предлагает приключения с бесчисленными развлечениями, он предлагает покой и безмятежность с его национальными парками, водопадами и потрясающими горными хребтами, простирающимися по всему региону.Самое главное, что Хорватия предлагает богатую историю и глубокую значимую культуру. Его замки, крепости, арены и архитектура Римской империи почти нетронуты и захватывают дух.

    Во-вторых, Хорватия остается неизведанной, нетронутой и недооцененной, хотя ее популярность за последние несколько лет стала расти после того, как ее рассказали на канале Discovery, National Geographic и других различных средствах массовой информации.

    Наконец, расположение очень личное для нас, поскольку мы местные.Я родом из Боснии, где пережил гражданскую войну в начале 90-х и прибыл в Хорватию в качестве беженца. До этого я все лето проводил в Хорватии, так как мой отец хорват. Для меня Хорватия — это действительно часть моей личности, и каждый год я с нетерпением ждал возможности провести время в этом волшебном месте. Это место наполнено красотой, волшебством и исцелением. Эта страна оставляет неизгладимое впечатление на всех, кто здесь побывал. За десятилетия я встретил тысячи людей, которые приезжали сюда, и всегда слышу одно: «Я влюблен в Хорватию, верните меня обратно.«В этом регионе есть что-то, что наполняет вас перспективой, жизнью, любовью и страстью.

    В настоящее время вы тоже ведете бизнес в Хорватии?

    Я являюсь цифровым кочевником с 2013 года. Хотя я провожу значительное количество времени в Хорватии каждый год, я веду бизнес со всего мира. В настоящее время я нахожусь в Тихуане, Мексика.

    Какие шаги вы предприняли, открывая бизнес, и были ли у вас проблемы вначале?

    Начало этого бизнеса было внезапным и спонтанным.После успешной работы в компании удаленного цифрового маркетинга в течение 5 лет я оказался в Хорватии в конце этого пути. Хотя мне нравилось то, что я делал, я был готов отпустить. Я продал свою предыдущую компанию покупателю в Соединенных Штатах и ​​в тот момент понял, что время пришло. Идея вынашивалась большую часть моей жизни. В то время я был в Дубровнике, поэтому я просто прыгнул и больше не оглядывался.

    Начало пути было наполнено волнением, за которым последовала большая работа.Создав свою предыдущую компанию с нуля, я сказал себе: «Не могу поверить, что делаю это снова». Начало всегда заполнено бессонными ночами, 80-часовой рабочей неделей и чрезмерными размышлениями, но, как согласятся большинство предпринимателей, путешествие того стоит. Социальный ученый, исследователь и рассказчик Брене Браун говорит, что мы настроены на борьбу, и если это так, мы могли бы оправдать ее.

    Для тех, кто никогда раньше не сталкивался с какой-либо формой совместной работы, каковы преимущества этого и почему предприниматели и фрилансеры должны это учитывать?

    Мы искренне хотим вдохновить тех, кто чувствует себя застрявшим в своей жизни, работе и самих себе, просто совершить прыжок веры. Это меняет все. Я твердо верю, что большинство удаленных сотрудников и людей, которые работают из дома, в конечном итоге устают от одиночества и отправляются в кафе или коворкинг, чтобы просто быть рядом с другими. Причина этого в том, чтобы просто бороться с одиночеством, потому что, как люди, мы изначально запрограммированы на связь.

    Remote Connections фокусируется именно на этом, и преимущества становятся еще более очевидными, поскольку мы создаем сплоченные глобальные сообщества, сотрудничество и дружбу на всю жизнь.Все наши усилия сосредоточены на человеческом общении. Исследования показали, что одиночество может быть смертельным, и благодаря нашему опыту удаленной работы участники могут почувствовать себя частью глобального сообщества единомышленников со всего мира, что вдохновляет их мотивацию и предлагает поддержку, общение, сострадание, веселье. , уверенность, новый взгляд на вещи, успех и многое другое.

    Чего ожидать людям, если они подпишутся на подобную программу?

    Одним словом, месяц в Хорватии, который изменит вашу жизнь! Remote Connections — это уникальный и значимый опыт, который сочетает в себе самые важные аспекты жизни для полного удовлетворения.Он создан для удаленных сотрудников, людей, не зависящих от местоположения, энтузиастов проектов и любителей социального воздействия. Он сочетает в себе самые важные аспекты нашей повседневной жизни, которые ведут к личному и профессиональному росту. Наш опыт включает в себя потрясающую страну, человеческие связи, глобальное сообщество, карьерный рост и захватывающий культурный опыт. Мы твердо верим, что связь = смысл.

    Для тех, кто мечтает работать удаленно (так что все!), Как люди сочетают интересную часть знакомства с новой страной с реальным выполнением работы?

    Отличный вопрос.Мы только что написали об этом статью, показывающую, что для большинства людей это никогда не проблема. Фактически, исследования показывают, что удаленные сотрудники, как правило, работают больше часов, чем традиционные офисные работники, и часто испытывают чувство вины, если не находятся на связи 24/7. (Вы можете прочитать статью здесь.)

    Для тех, кто борется с равновесием, я бы сказал, что все дело в том, что вы любите. Когда вы увлечены своей удаленной работой, вы склонны уделять ей приоритетное внимание, и это не похоже на работу. Если вы не увлечены этим и находитесь в переходном периоде, то хорошие рабочие привычки являются ключевыми.Убедитесь, что вы придерживаетесь расписания и расставляете приоритеты для своих задач, чтобы вы могли наслаждаться путешествиями и посещением нового города, как только вы закончите работу в течение дня. Помните, что удаленная работа позволяет вам вести такой образ жизни, поэтому постарайтесь не потерять его. Уже одно это является отличным мотиватором для многих удаленных сотрудников. Все дело в вашем мировоззрении.

    Если бы один из наших читателей захотел создать подобную программу для удаленной работы, какой лучший совет вы бы ему дали?

    Совет номер один, который я хотел бы дать тем, кто заинтересован в создании чего-то подобного: убедитесь, что вы любите людей, что вы любите общаться и что это ваша страсть.Независимо от того, что вы делаете, страсть — это вещь номер один, которая подпитывает ваш успех во всех сферах вашей жизни.

    Что вам больше всего нравится в программе?

    Одно слово, которое так много значит для стольких людей, но я твердо верю, что оно является ингредиентом невероятной жизни и путешествия. СВЯЗЬ!

    Продано! Где мы можем узнать больше и зарегистрироваться?

    Для тех, кто хочет узнать о нашей миссии и видении, посетите наш веб-сайт по адресу remoteconnections.co, где вы можете узнать больше и подать заявку на участие (есть процесс подачи заявки и собеседования). Всю информацию можно найти на нашем веб-сайте, а также в наших каналах в социальных сетях, и у нас есть послы бренда почти в каждом крупном городе мира, поэтому вы можете связаться с ними через наши каналы в социальных сетях, а также на мероприятиях удаленных подключений в твой город.

    Ой, ты выглядишь потерянным — 404!

    Переключить навигацию

    • О нас
    • Входящий маркетинг
    • HubSpot
      • Наш процесс
      • План процветания
    • Услуги
      • Конструкция
      • Развитие
      • Содержимое
    • Ресурсы
    • Блог
    • Контакт

    Переключить навигацию

    • О нас
    • Входящий маркетинг
    • HubSpot
    • Наш процесс
    • План процветания
    • Услуги
    • Ресурсы
    • Блог
    • Контакт
    Страница, которую вы ищете, была перемещена, удалена, переименована или могла вообще не существовать.

    Извините за это!

    Думаете, это ошибка? Свяжитесь с нами по электронной почте!
    Вы также можете попробовать просмотреть нашу карту сайта.

    Стефан Деретич | Портфолио фрилансера Товар № 48550

    Все, что вам нужно знать о страховании автомобилей с полным покрытием

    Что такое автострахование с полным покрытием?
    Хотя многие думают, что у них есть автострахование с полным покрытием, в действительности все обстоит иначе.Основная проблема с этим термином заключается в том, что не существует такой вещи, как автострахование с полным покрытием. Полное покрытие — это термин, который обычно используется для описания комбинации различных планов страхования автомобилей, которые смешиваются и сочетаются друг с другом, чтобы предоставить вам лучшую страховку на случай аварии, повреждения или кражи. Идеальное автострахование с полным покрытием варьируется от человека к человеку, в зависимости от конкретных потребностей, которые у вас есть, включая, помимо прочего, ваши активы, профиль риска и финансовые возможности.Какие виды автострахования вы можете выбрать?
    Для вашего автомобиля существует множество различных планов страхования, а некоторые страховые компании разрешают даже индивидуальные планы страхового покрытия. При этом основными тремя категориями автострахования являются:
    Страхование ответственности
    Страхование ответственности также иногда называют покрытием без вины, и оно покрывает ущерб, который вы причиняете другим лицам или имуществу в результате аварии, которую вы причинили. Это покрытие является обязательным практически везде, так как в большинстве штатов требуется определенный уровень этого страхового плана.Как правило, различают три ограничения для покрытия ответственности: максимальная сумма, подлежащая выплате за телесные повреждения, на человека; максимальная сумма, подлежащая выплате за телесные повреждения при несчастном случае; и максимальная сумма, подлежащая выплате за имущественный ущерб.
    Покрытие столкновений
    План страхования на случай столкновения используется для гарантии того, что вы получите оплату за ущерб, причиненный вашему транспортному средству в результате столкновения с другим транспортным средством или неодушевленным предметом. Основное различие между этим и покрытием ответственности заключается в том, что не имеет значения, кто стал причиной аварии, и оно покрывает только ущерб, нанесенный вашему транспортному средству.Комплексное покрытие
    Как и в случае столкновения, комплексное страхование также покрывает ущерб, причиненный вашему автомобилю, но в этом случае покрываемый ущерб — это ущерб, причиненный внешними факторами. Точные факторы варьируются от одной страховой компании к другой, но обычно они включают стихийные бедствия (пожар, наводнение и шторм), вандализм, кражи и ущерб, причиненный животными. Что касается полного покрытия, то следует помнить о возможности снижения вашей франшизы.
    Страхование от травм (медицинские выплаты)
    Это покрытие покрывает расходы после несчастного случая, то есть страховая компания покрывает расходы на любые возможные медицинские счета как для вас, так и для всех вовлеченных пассажиров.Этот план также может покрывать сохранение дохода, услуги по уходу за детьми и расходы на похороны. Это страховое покрытие также действует, если вы гуляли или ехали на велосипеде, если причиной этого стал автомобиль.
    Страхование незастрахованных и недостаточно застрахованных
    Это покрытие гарантирует, что вы все настроены, на случай, если вы попадете в автомобильную аварию, вызванную человеком, у которого нет страховки или не имеет достаточного покрытия, что может произойти, как решают многие люди. возьмите только регулируемое государством минимальное покрытие ответственности.Существует две разные версии этого плана покрытия — Страхование автомобилистов для незастрахованных и недостаточно застрахованных и для незастрахованных и недостаточно застрахованных.
    Менее известные планы страхового покрытия
    Покрытие помощи на дороге, иногда также называемое «Покрытие затрат на буксировку и оплату труда», покрывает любые расходы на помощь на дороге, включая (но не ограничиваясь) буксировку, если ваш автомобиль останавливается из-за какой-либо механической или электрической поломки.
    План покрытия возмещения расходов на аренду покрывает расходы по аренде автомобиля, пока ваш автомобиль находится на ремонте, хотя существуют определенные ограничения, которые варьируются от одной страховой компании к другой.Страхование нестандартных деталей и оборудования может быть столь же важным, как и любой план покрытия, упомянутый выше, поскольку он покрывает любые повреждения или кражу оборудования вашего автомобиля. Это может быть довольно рентабельным, особенно если у вас много высококачественных нестандартных деталей, таких как телевизоры и звуковые системы, кузовные работы и тому подобное.
    План покрытия ссуды или лизинга выплачивает определенный процент от денежной стоимости вашего автомобиля, если ваш автомобиль будет подсчитан.
    Как решить, когда пора получить полное покрытие?
    Хотя существует множество различных факторов, которые повлияют на ваше решение, получать или нет план страхования с полным покрытием, наиболее важными являются возраст вашего автомобиля и размер вашей франшизы.Если у вас новый автомобиль, совершенно необходимо, чтобы вы получили полное покрытие, и вы сможете сохранить свою франшизу на приемлемом уровне. Это гарантирует, что вы не застрянете в длительных процессах рассмотрения претензий, которые никогда не могут быть вполне определенными. Вы также избавите себя от необходимости доказывать, кто на самом деле вызвал аварию, что вам определенно не нужно.
    После того, как вы выплатите свой автомобиль, вам, вероятно, придется увеличить размер франшизы, но в то же время некоторые планы покрытия станут излишними.Прекрасным примером для этого случая является покрытие выплаты ссуды или аренды. Это означает, что, хотя у вас все еще может быть большая часть полного пакета страхового покрытия, вы будете платить аналогичную сумму денег.
    Когда вы дойдете до точки, когда на самом деле будет дешевле просто купить новую машину, чем отремонтировать старую, это подходящий момент, чтобы отказаться от всех планов страхового покрытия, кроме страхового покрытия ответственности. При этом имейте в виду, что некоторые планы страхового покрытия все еще могут пригодиться. Прекрасным примером этого может быть план страхования от травм.Сколько конкретно стоит полное покрытие и как сделать его более доступным?
    Получить конкретное число в качестве ответа на этот вопрос непросто, поскольку на это число влияет множество компонентов. Хотя на это число влияет множество компонентов, некоторые из которых включают ваш профиль риска, а также страховую компанию, которую вы выбрали, есть некоторые средние значения для большинства распространенных типов страхового покрытия. Вот расценки на страхование автомобилей с полным покрытием:
    Для минимального покрытия ответственности цена, которую вы должны платить каждый месяц, составляет от 250 до 600 долларов.Для типичного плана страхования с полным покрытием (который включает комплексное страхование и страхование от столкновений) цена колеблется от 1000 до 1600 долларов США.
    Для премиального покрытия ежемесячная цена варьируется от 1,100 до 2,500 долларов США.
    Дешевое автострахование с полным покрытием
    Хотя может показаться, что полное покрытие может быть действительно дорогостоящим, есть несколько проверенных способов, которые гарантируют, что вы получите наилучшую возможную сделку. Если вы хотите заключить выгодную сделку, вам придется много разглядывать витрины, чтобы иметь возможность заключить самую выгодную сделку. Поиск страховой компании, у которой есть скидки на планы страхового покрытия, — это первый шаг к получению дешевой автомобильной страховки с полным покрытием.Еще одним из таких шагов является сравнение того, что разные страховые компании могут предложить практически за одинаковую сумму денег. Не бойтесь использовать Интернет, чтобы помочь вам принять решение, так как существует множество веб-сайтов, которые предоставляют разные сравнения по всем штатам.
    Крайне важно выбрать страховую компанию с хорошей репутацией, что потребует обширного исследования, чтобы получить больше информации об этой компании. Имейте в виду, что, хотя на первый взгляд более дешевые планы страхового покрытия могут показаться лучшим вариантом, это не всегда так.При поиске самой дешевой автомобильной страховки помните о покрытии, которое оно предоставляет, и проверьте, достаточно ли оно.
    Важно быть мудрым в выборе плана автострахования с полным покрытием, так как это повлияет на ваши активы, здоровье и кошелек, а это означает, что вы должны приложить необходимые усилия, чтобы сделать наилучший выбор. Еще одна вещь, которой вам следует опасаться, — это то, что вы действительно понимаете политику, которую выбираете, прежде чем поставить свою подпись.

    Механизм рекрутирования Stx17 в аутофагосомы через IRGM и белки Atg8 млекопитающих | Журнал клеточной биологии

    Аутофагия — это консервативный эукариотический процесс с метаболическими, иммунными и общими гомеостатическими функциями в клетках млекопитающих. Аутофагосомы млекопитающих сливаются с лизосомами в процессе, управляемом SNARE, который включает синтаксин 17 (Stx17). Как Stx17 перемещается в аутофагосомы, неизвестно. В этом исследовании мы показываем, что механизм рекрутирования Stx17 в аутофагосомы в клетках человека включает небольшую гуанозинтрифосфатазу IRGM.Stx17 напрямую взаимодействует с IRGM, а эффективное рекрутирование Stx17 в аутофагосомы требует IRGM. И IRGM, и Stx17 напрямую взаимодействуют с белками Atg8 млекопитающих, таким образом направляясь к аутофагосомам. Мы также показали, что Stx17 играет важную роль в защите от инфекционных агентов и что взаимодействие Stx17-IRGM нацелено на фактор вирулентности ВИЧ Nef.

    Аутофагия — это совокупность внутриклеточных гомеостатических процессов, играющих роль в контроле качества цитоплазмы и метаболизме, влияющих на широкий спектр дегенеративных, воспалительных и инфекционных заболеваний (Mizushima et al., 2008). Наиболее изученная форма аутофагии, макроаутофагия, зависит от факторов, связанных с геном аутофагии (Atg) у дрожжей, где эта система была генетически определена (Mizushima et al., 2011). Многие сходства основного аппарата Atg в клетках дрожжей и млекопитающих (Mizushima et al., 2011) дополняются качественными и количественными различиями между тем, как клетки млекопитающих и дрожжевые клетки выполняют аутофагию. Это распространяется, но не ограничивается расширяющимся спектром рецепторов млекопитающих (Birgisdottir et al., 2013; Рогов и др., 2014; Wei et al., 2017) и регуляторы рецепторов (Kimura et al., 2016) для избирательной аутофагии, а также доминирующую роль в клетках млекопитающих убиквитина (Khaminets et al., 2016) и галектина (Thurston et al., 2012; Chauhan et al., 2016; Kimura et al., 2017), позволяющие распознавать цели аутофагии. Возможно, наиболее интригующими различиями являются роли уникальных регуляторов аутофагии, таких как, среди других известных на раннем этапе, связанных с генетической предрасположенностью к заболеваниям (Wellcome Trust Case Control Consortium, 2007), связанная с иммунитетом GTPase M (IRGM), которая связывает иммунную систему и основной механизм Atg для контроля аутофагии в клетках человека (Singh et al., 2006, 2010; Chauhan et al., 2015).

    Роль Atg-конъюгирующей системы, которая приводит к C-концевой липидизации дрожжевого Atg8 и его паралогов у млекопитающих, в образовании аутофагосом недавно была поставлена ​​под сомнение (Nishida et al., 2009; Nguyen et al., 2016; Tsuboyama et al. al., 2016), подчеркивая вместо этого его роль в слиянии аутофагосом и лизосом (Nguyen et al., 2016; Tsuboyama et al., 2016). Количество и сложность факторов Atg8s млекопитающих (mAtg8s: LC3A, LC3B, LC3C, GABARAP, GABARAPL1 и GABARAPL2; Weidberg et al., 2010), которые являются субстратом для механизма конъюгации Atg, который липидизирует C-концевые остатки Gly всех Atg8 после процессинга протеазами семейства Atg4 млекопитающих (Fujita et al., 2008; Fernández and López-Otín, 2015), превосходит одиночный дрожжевой гомолог Atg8. В то время как LC3B и дрожжевой Atg8 часто приравниваются в распознавании области взаимодействия LC3 (LIR) или мотива, взаимодействующего с Atg8 (AIM; Pankiv et al., 2007; Noda et al., 2010; Birgisdottir et al., 2013; Popelka and Klionsky). , 2015) на рецепторах селективной аутофагии, mAtg8 имеют дополнительные функции (Sanjuan et al., 2007; Weidberg et al., 2010; Alemu et al., 2012; Нгуен и др., 2016; Tsuboyama et al., 2016), которые до конца не изучены. В отличие от дрожжей (Xie et al., 2008), инактивация всех шести mAtg8 (Nguyen et al., 2016) или компонентов аппарата конъюгации Atg (Tsuboyama et al., 2016) не приводит к предотвращают образование аутофагосом (хотя это влияет на их размер), как это происходит у дрожжей (Xie et al., 2008), но вместо этого предотвращает (Nguyen et al., 2016) или значительно задерживает (Tsuboyama et al., 2016) их слияние с лизосомами.

    Точно так же, как аутофагосомы созревают в клетках млекопитающих в автолизосомы, будь то слияние с диспергированными поздними эндосомными и лизосомными органеллами (Itakura et al., 2012; Tsuboyama et al., 2016) или прогрессирование в другие терминальные структуры (Zhang et al., 2015 ; Kimura et al., 2017), и как это соотносится с доставкой аутофагосом в единственную дрожжевую вакуоль (Liu et al., 2016), несмотря на недавние достижения (Itakura et al., 2012; Hamasaki et al., 2013; Guo et al., 2014; Diao et al., 2015; McEwan et al., 2015; Nguyen et al., 2016; Wang et al., 2016; Wijdeven et al., 2016) до конца не изучен. Одним из ключевых известных событий во время формирования аутолизосом млекопитающих является приобретение аутофагосомами (Itakura et al., 2012; Hamasaki et al., 2013; Takáts et al., 2013; Arasaki et al., 2015; Diao et al., 2015). ; Tsuboyama et al., 2016) синтаксина 17 Q a -SNARE (Stx17; Steegmaier et al., 2000), предвещая прогрессию возникающих аутофагосомных органелл в направлении слияния аутофагосома-лизосома (Itakura et al., 2012). Stx17, который играет несколько потенциально различных ролей (Itakura et al., 2012; Hamasaki et al., 2013; Arasaki et al., 2015; McLelland et al., 2016), однажды привлеченный к аутофагосомам, образует комплекс транс-SNARE путем спаривания с R-SNARE (например, VAMP8; Furuta et al., 2010; Itakura et al., 2012; Wang et al., 2016), расположенными внутри поздних эндосомальных / лизосомных мембран (Jahn and Scheller, 2006).Для завершения четырехспирального пучка SNARE, необходимого для слияния мембран (Jahn and Scheller, 2006), Stx17 образует комплексы с цитозольным Q bc -SNARE SNAP-29 (Itakura et al., 2012; Diao et al., 2015 ). Stx17, кроме того, взаимодействует (Jiang et al., 2014; Takáts et al., 2014) с многокомпонентным мембранным тросом, известным как связывающий комплекс гомотипического слияния и сортировки белков (HOPS) (Balderhaar and Ungermann, 2013; Solinger and Spang, 2013), который также действует как белок Sec1-Munc18 и контролирует состояние транс-SNARE-комплексов, защищая четырехспиральный пучок SNARE, обычно разбираемый N-этилмалеимид-чувствительным фактором (NSF) / αSNAP (Xu et al., 2010). Несколько факторов, включая ATG14L (Diao et al., 2015), PLEKHM1 (McEwan et al., 2015), EPG5 (Wang et al., 2016) и Rab-взаимодействующий лизосомный белок (RILP; Wijdeven et al., 2016) , взаимодействуют с комплексом Stx17-SNAP-29-VAMP8 и усиливают его, часто вместе с HOPS.

    Хотя приобретение Stx17 мембранами аутофагосом представляет собой ключевой этап слияния аутофагосом с лизосомами, механизм рекрутирования Stx17 специфически на аутофагосомы неизвестен.Было показано, что Stx17 вставляется в аутофагосомную мембрану как закрепленный на хвосте белок типа шпильки, поступающий из цитозоля или других мест (Itakura et al., 2012). Рекрутирование Stx17 в возникающие аутофагосомы сильно зависит от аппарата липидирования LC3 (Tsuboyama et al., 2016). Тем не менее, как Stx17 распознает и специфически перемещается в аутофагосомы, неизвестно. В этом исследовании мы показываем, что транслокация Stx17 в аутофагосомы в клетках человека стимулируется IRGM.И Stx17, и IRGM взаимодействуют напрямую с mAtg8, и все три компонента обнаруживаются в общем белковом комплексе, который мы называем частицами распознавания аутофагосом (ARP) для доставки Stx17 к подходящим мембранам во время аутофагии.

    Микроскопия со сверхвысоким разрешением (SR) эндогенного LC3 в клетках, экспрессирующих GFP-Stx17, выявила ряд профилей, представляющих различные стадии аутофагосомного пути (рис.1 A и S1, профили типа I – VII) и указали на разделение <25 нм для 75% кластерных центров Stx17 и LC3 в пределах плеч профилей типа I, представляющих развитые фагофоры (рис. 1, B и C). Эта близость предполагает возможность прямого или очень тесного взаимодействия между Stx17 и LC3. Таким образом, мы рассмотрели простейшую модель, согласно которой паралоги дрожжей Atg8 млекопитающих (mAtg8s: LC3A, LC3B, LC3C, GABARAP, GABARAPL1 и GABARAPL2), например, LC3B в качестве mAtg8, обычно используемого для визуализации аутофагосом, могут играть роль в контроле рекрутирования Stx17 в обычные аутофагосомы.Мы обнаружили эндогенный Stx17 в белковых комплексах с mAtg8s (экспрессируемых как слитые GFP), в основном с LC3B и GABARAP (фиг. 1 D и S2 A). Используя эксперименты с раскрытием GST, мы определили, что Stx17 напрямую связывает LC3B и GABARAP (Fig. 1 E). Затем мы исследовали последовательность Stx17 на наличие потенциальных мотивов LIR и обнаружили двух разных кандидатов (LIR1 172–175 и LIR2 189–192 ; рис. 2 A) в области SNARE Stx17, соответствующих обоим LIR. правила мотива (Birgisdottir et al., 2013) и доступность внутри неупорядоченной области белка (Popelka, Klionsky, 2015). Связанные с последним аспектом, домены SNARE (которые являются подобластями внутри соответствующих белков SNARE), когда они не находятся в комплексах с другими факторами, могут иметь внутренне неупорядоченную структуру, которая в конечном итоге переходит от в значительной степени неструктурированной к энергетически предпочтительному четырехспиральному комплексу во время слияния мембран (Fasshauer et al. др., 1997). Когда мы мутировали остатки, взаимодействующие с ароматическими и алифатическими карманами в LIR-кандидатах, Stx17LIR ** (двойной мутант LIR Stx17 из LIR1 172WA – 175LA и LIR2 189FA – 192LA ) показал пониженную способность по сравнению с WT Stx17 (Stx17WT) к связывают LC3B и GABARAP в коиммунопреципитатах (coIPs; фиг.2 B и S2 B) и опускания GST (рис. S2 C). Таким образом, Stx17 обладает внутренней способностью связывать mAtg8.

    Рекрутирование

    Stx17 в аутофагосомы, когда аппарат конъюгации mAtg8 инактивирован, уменьшается, хотя и не отменяется полностью (Tsuboyama et al., 2016). Когда мы использовали ранее охарактеризованные клетки NIh4T3, экспрессирующие доминантно-отрицательный Atg4B C74A (Fujita et al., 2008), который предотвращает липидирование всех mAtg8, это значительно снизило способность GFP-Stx17 образовывать точки в качестве меры мембранной ассоциации, количественно определяемой. методом высокосодержащей (УВ) микроскопии (рис.2 В). Эти наблюдения ставят вопрос о форме mAtg8s, которые ассоциируются с Stx17. Обе формы (липидированная и нелипидированная) LC3B были обнаружены в coIPs с Stx17 в базовых условиях (Fig. 2 D). Однако индукция аутофагии голоданием увеличивала отношения LC3-II / LC3-I в иммунопреципитатах Flag-Stx17 (IPs; рис. 2 D). Таким образом, индукция обычной аутофагии голоданием частично перенаправила Stx17 в форму LC3-II.

    Затем мы протестировали эффекты LIR-мутанта Stx17 (Stx17LIR **) на рекрутирование Stx17 в аутофагосомы с помощью HC, используя временнóй подход.Мы наблюдали уменьшение перекрытия между профилями LC3 + и GFP-Stx17LIR ** по сравнению с GFP-Stx17WT через 15–30 минут после индукции аутофагии голоданием (рис. 2 E и S2 D). Таким образом, мутации LIR влияли на кинетику рекрутирования Stx17 в аутофагосомы. По прошествии 1 часа, когда ассоциация Stx17 с аутофагосомами начала снижаться, разница между Stx17WT и Stx17LIR ** исчезла. Т.о., Stx17 LIRs важны для его рекрутирования, но не для его циклического отключения автолизосом.Кроме того, мы проверили, важны ли LIR в Stx17 для селективности присутствия Stx17 на других органеллах, где, как известно, делится Stx17 (Steegmaier et al., 1998, 2000; Itakura et al., 2012; Hamasaki et al., 2013; Arasaki et al., др., 2015). Stx17LIR ** показал повышенную совместную локализацию с TOM20 (митохондрии) и BiP (ER; рис. S2, E и F). Все эти наблюдения согласуются с выводами Tsobuyama et al. (2016), указывая на то, что дефект в системе конъюгации mAtg8 задерживает рекрутирование Stx17.

    Хотя мутант Stx17 LIR ** демонстрировал пониженное связывание с LC3B (фиг. 2 B) и GABARAP (фиг. S2 B), между этими mAtg8 и Stx17 в клетках существовала некоторая остаточная ассоциация. В ходе наших экспериментов с Stx17 мы наблюдали независимо от результатов в предыдущем разделе склонность Stx17 к совместной локализации (рис. 3, A и B; и рис. S2 G) с IRGM, связанной с иммунитетом GTPase, участвующей в регуляции. аутофагии (Singh et al., 2006; Chauhan et al., 2015). Кроме того, ассоциация между Stx17 и IRGM была подтверждена в coIP между GFP-IRGM и FLAG-Stx17 (рис. S2 H), обратными coIP (рис. S2 I) и coIP эндогенного IRGM с GFP-Stx17 (рис. S2 J). . Эндогенный IRGM был обнаружен в комплексах с Stx17 (а также с LC3; рис. 3 C и S2 K). Stx17LIR **, связанный с IRGM (фиг. S2 L), предполагая, что связывание IRGM и Stx17 не зависело от ассоциации Stx17 через его LIR с mAtg8.

    Затем мы проверили, может ли функция набора Stx17 IRGM быть отделена от ранее описанной функции в сборке основных факторов инициации аутофагии (Chauhan et al., 2015). Когда тестировали мутант IRGM S47N (соответствующий неактивным GTPases; Singh et al., 2010), ассоциация IRGM-Stx17 была потеряна (рис. 3, D и F). Тот же мутант IRGM S47N не утратил связывания с Beclin1 (рис. 3, E и F). Напротив, другой мутант IRGM, IRGM Kmut , который не может собирать ULK1, Beclin1 и ATG16L1 во время инициации аутофагии (Chauhan et al., 2015), все еще связывает Stx17 (Fig. 3, G-I). Таким образом, роль IRGM в сборке комплексов инициации аутофагии и его роль в рекрутировании Stx17 в аутофагосомы могут быть разделены.

    Ассоциация между GFP-Stx17 и FLAG-IRGM усиливалась после индукции аутофагии с использованием ингибитора mTOR pp242 (фиг. S2 M). Повышенная ассоциация между WT IRGM и Stx17 наблюдалась в присутствии негидролизуемого аналога GTP (рис. S2 N). Взаимодействия между IRGM и Stx17 также были протестированы с использованием метода бесконтактного биотинилирования с использованием модифицированного зонда аскорбатпероксидазы (APEX) APEX2 (Lam et al., 2015). Этот анализ был разработан (Lam et al., 2015) для проведения анализа in vivo белок-белковой близости, в результате чего слияние APEX2 с одним из партнеров позволит биотинилирование его соседа на основе короткого периода полужизни и небольшого количества меток. радиус <20 нм продукта пероксидазной реакции APEX с биотин-фенолом (биотин-феноксильный радикал; Rhee et al., 2013). IRGM сливали на своем N-конце с APEX2, и трансфицированные клетки инкубировали с биотинфенолом. После реакции биотинилирования (Lam et al., 2015), продукты в клеточных лизатах инкубировали с гранулами стрептавидина, адсорбированные белки элюировали, а уровни эндогенного Stx17, связанного со стрептавидиновыми гранулами и элюированного из них, оценивали с помощью иммуноблоттинга (рис. S3 A). Экспрессия APEX2-IRGM приводила к усилению биотинилирования эндогенного Stx17 (фиг. S3B), что указывает на близость IRGM и Stx17 в клетках. Наконец, прямое связывание Stx17-IRGM было продемонстрировано в анализах GST с понижением (рис. 3 J).

    Как IRGM может рекрутировать Stx17 в аутофагосому? Мы предположили, что IRGM также распознает LC3 / mAtg8s на этих органеллах, таким образом изменяя рекрутирование Stx17 на аутофагосому.Все mAtg8 были обнаружены в coIP с комплексами FLAG-IRGM (рис. S3 F). Показатели GST показали, что IRGM напрямую взаимодействует с mAtg8s (рис. 6 A).

    Мы проанализировали IRGM на наличие потенциальных последовательностей LIR на основе установленных критериев (Birgisdottir et al., 2013) и обнаружили три предполагаемых мотива (L1, L2 и L3), которые, как предполагается, экспонируются на поверхности белка с использованием известной кристаллической структуры гомолог IRGM 1TQ6 (Irga6; IIGP1; NCBI Gene ID 60440; фиг.S4, A – C). Пептидные массивы IRGM с использованием ранее описанной стратегии картирования потенциальных LIRs (Mandell et al., 2014; Kimura et al., 2015) показали, что L1 – L3-содержащие пептиды связывают mAtg8s (Fig. S4 D). Другой сайт связывания наблюдали в блотах пептидной матрицы (L4; фиг. S4 D), но предполагалось, что соответствующие остатки будут похоронены, поэтому дальнейшее исследование L4 не проводилось. Когда мы мутировали предполагаемых LIR-кандидатов, IRGM и mAtg8 все еще ассоциировались без какого-либо заметного снижения аффинности при тестировании с помощью GST Pulldown и CoIP (рис.S4, D – I). Мы также наблюдали, что мутации в предполагаемых LIRs в IRGM не влияли на его связывание с Stx17 (Fig. S4 H).

    Затем мы проверили, имеет ли место стыковка LIR (LDS; Behrends et al., 2010) в LC3B значение для связывания IRGM, и обнаружили, что мутант LDS LC3B (F52A / L53A; Behrends et al., 2010) полностью сохраняет связывание IRGM. емкость (рис. 6 В). Таким образом, возникает следующая модель, посредством которой IRGM взаимодействует с Stx17, а IRGM взаимодействует с mAtg8s в режиме, отличном от LDS-LIR, таким образом рекрутируя Stx17 в аутофагосомы.Stx17, в свою очередь, связывается с mAtg8s посредством обычных взаимодействий LIR. Эта комбинация регулирует рекрутирование Stx17 в аутофагосомы.

    Модель, изображающая голокомплекс Stx17-LC3B-IRGM, который мы назвали ARP, демонстрируя детали сайтов взаимодействия, очерченных выше, показана на рис. 6 C.

    Stx17, a Q a -SNARE, взаимодействует с Q bc -SNARE SNAP-29, рекрутируемым из цитозоля, и с R-SNARE VAMP8 на лизосомных мембранах для проведения слияния мембран между аутофагосомами и лизосомами лизосом (Itakura etakura). al., 2012; Diao et al., 2015). GFP-VAMP8, коиммунопреципитированный с FLAG-IRGM (фиг. S4 J), и эндогенный VAMP8 был обнаружен в coIP эндогенного IRGM (фиг. 7 A). Нокдауны IRGM снижали количество эндогенного Stx17 в комплексах coIP с VAMP8 (рис. 7 B), предполагая, что IRGM вносит вклад в сборку Stx17 с его родственным R-SNARE, участвующим в слиянии аутофагосома-лизосома (Itakura et al., 2012; Diao et al., 2015). Присутствие VAMP8 и IRGM в общих комплексах увеличивалось при индуцировании аутофагии с помощью pp242 (рис.7, В и Г). Т.о., IRGM взаимодействует не только с Stx17, но он также находится в комплексах с родственным Stx17 R-SNARE VAMP8, участвующим в слиянии аутофагосома-лизосома (Itakura et al., 2012; Diao et al., 2015).

    Stx17 взаимодействует (Jiang et al., 2014; Takáts et al., 2014) с комплексом привязки HOPS (Balderhaar, Ungermann, 2013; Solinger, Spang, 2013), который контролирует статус транс-SNARE-комплексов (Xu et al. ., 2010). GFP-IRGM коиммунопреципитируется с VPS39 и VPS33A (рис. 7, E и F), компоненты HOPS, как показано, находятся в комплексе с Stx17 (Jiang et al., 2014). GFP-IRGM не взаимодействовал с VPS8 (рис. 7 G), компонентом комплекса core vacuole / endosome tethering (CORVET) класса C, который разделяет основные компоненты с HOPS, но функционирует при эндосомном слиянии (Balderhaar and Ungermann, 2013; Solinger). и Спанг, 2013). Таким образом, IRGM находится в комплексах, которые содержат не только Q a -SNARE Stx17 и R-SNARE VAMP8, но также включают компоненты HOPS, которые ранее сообщались как необходимые для обнаружения комплекса Stx17-VAMP8 (Jiang et al., 2014). Учитывая, что IRGM и Stx17 также присутствуют в комплексах ARP, мы задались вопросом, не изменяется ли, когда Stx17 и IRGM находятся в комплексах с HOPS, статус ассоциации Stx17 с mAtg8s. В самом деле, HOPS влияет на уровни ассоциации mAtg8 с Stx17, поскольку нокдаун VPS33A увеличивает количество эндогенного Stx17 в coIPs с GFP-LC3B (фиг. 7 H). Это указывает на то, что рекрутирование Stx17 с помощью ARP в аутофагосомы может сопровождаться вытеснением mAtg8s из Stx17, чтобы освободить его домен SNARE и сделать его доступным для взаимодействий с его родственным R-SNARE.Альтернативно, увеличение ассоциации Stx17-LC3 в клетках, пораженных HOPS, может быть косвенным эффектом блока слияния и накопления предшественников. Таким образом, необходимы дальнейшие эксперименты, чтобы различить эти возможности.

    IRGM влияет на контроль M. tuberculosis посредством аутофагии (Singh et al., 2006). Было показано, что IRGM регулирует сборку механизмов инициации аутофагии (Chauhan et al., 2015), но влияние IRGM на созревание не установлено. Мы обратились к этому с помощью микроскопии HC. Нокдауны IRGM в клетках HeLa, стабильно экспрессирующих mRFP-GFP-LC3 (Kimura et al., 2007), указывают на дефекты созревания (Fig. S4 K). Кроме того, нокдаун IRGM снижает колокализацию между аутофагосомными (LC3) и лизосомными (LAMP2) маркерами в клетках с аутофагией, вызванной голоданием в присутствии ингибитора потока аутофагии бафиломицина A1, чтобы предотвратить деградацию LC3 и сохранить его в качестве маркера / идентификатора компартмента (рис.S4 L). Эти эффекты наблюдались во время аутофагической реакции на голодание, что означает, что IRGM оказывает влияние на события, находящиеся ниже по ходу стадий инициации в обычных условиях, индуцирующих аутофагию. Затем мы проверили значимость в борьбе с M. tuberculosis взаимодействующего партнера IRGM Stx17, исследованного в этом исследовании. Мы нокаутировали Stx17 в макрофагах THP1 и исследовали их способность контролировать внутриклеточный M. tuberculosis (рис. 8 A). Как ранее было показано для IRGM (Singh et al., 2006), Stx17 необходим для эффективного устранения внутриклеточных M.tuberculosis (рис. 8 A), который встречается в аутолизосомах (Gutierrez et al., 2004). Эти наблюдения добавляют Stx17 к факторам, участвующим в аутофагии в контроле внутриклеточного M. tuberculosis.

    Известно, что белок Nef

    ВИЧ ингибирует аутофагическое созревание (Kyei et al., 2009; Shoji-Kawata et al., 2013), а сверхэкспрессия NEF приводит к накоплению аутофагосом за счет их перехода в аутолизосомы (Kyei et al. ., 2009). IRGM является мишенью для белка Nef ВИЧ (Grégoire et al., 2011). Открытие того, что IRGM взаимодействует с Stx17 и помогает его рекрутированию в аутофагосомы, а также способствует последующим событиям с SNARE и HOPS, участвующим в созревании аутофагосом, поставило вопрос о том, оказывает ли связывание Nef с IRGM (Grégoire et al., 2011) свое влияние на созревание через взаимодействия IRGM с Stx17. Когда Nef-GFP коэкспрессировался с FLAG-IRGM, менее эндогенный Stx17 был обнаружен в комплексах FLAG-IRGM (рис.8 Б). Более ранняя работа (Kyei et al., 2009) установила, что мутант Nef 174DD175-to-174AA175 (Nef DD-AA ) не ингибирует созревание аутофагосом, и поэтому мы проверили, связан ли Nef DD-AA с IRGM. В клетках, коэкспрессирующих FLAG-IRGM с Nef-GFP, Nef DD-AA -GFP или GFP, положительный coIP был обнаружен только между FLAG-IRGM и Nef-GFP, но не между FLAG-IRGM и Nef DD-AA -GFP (рис. 8 C). Когда мы тестировали влияние не связывающегося IRGM мутанта Nef DD-AA на взаимодействия между FLAG-IRGM и эндогенным Stx17, мутант Nef DD-AA потерял способность препятствовать ассоциации IRGM-Stx17 (рис.8 Б). Таким образом, взаимодействия, обнаруженные в этом исследовании между IRGM и Stx17, нацелены на белок Nef ВИЧ и соответствуют известным ингибирующим эффектам Nef на аутофагическое созревание (Kyei et al., 2009; Shoji-Kawata et al., 2013) .

    Это исследование объясняет, как Stx17, ключевой SNARE, ведущий к созреванию аутофагосом (Itakura et al., 2012; Hamasaki et al., 2013; Tsuboyama et al., 2016), рекрутируется в аутофагосомы в качестве прелюдии к слиянию аутофагосом и лизосом.Простота этого механизма рекрутирования не должна ускользать от внимания, учитывая, что именно LC3 и др. MAtg8s на мембранах аутофагосом непосредственно связывают Stx17 и IRGM в процессе приобретения Stx17 аутофагосомами. Важно отметить, что IRGM связывается непосредственно с C-концевым участком Stx17, который, как известно, необходим для его доставки в аутофагосомы (Itakura et al., 2012; Hamasaki et al., 2013; Tsuboyama et al., 2016). IRGM, в свою очередь, связывается с mAtg8, такими как LC3, который обеспечивает адрес для доставки этого комплекса в аутофагосомы.

    Прямое связывание mAtg8s с доменом SNARE Stx17 может играть вспомогательную роль в повышении верности рекрутирования Stx17 в аутофагосомы (см. Модель на рис. 9). Он также, вероятно, играет роль в окклюзии домена SNARE Stx17 и его доступности. Мы прогнозируем, что mAtg8s, связанные с LIRs в рамках мотива SNARE Stx17, помогают предотвратить преждевременное вовлечение Stx17 в комплексы trans-SNARE. Когда аутофагические везикулы готовы к слиянию, e.g., после их закрытия, mAtg8s, связанные с доменом SNARE Stx17, должны быть замещены такими факторами, как HOPS, чтобы обеспечить полное спаривание SNARE и слияние аутофагосома-лизосома. Почему mAtg8 недостаточно для рекрутирования Stx17 в аутофагосомы и необходимы дополнительные факторы? Лучше всего это понять с филогенетической точки зрения. LIRs типа, проанализированного в этом исследовании, отсутствуют у Drosophila melanogaster Stx17, хотя Stx17 LIR WETL сохраняется от человека к рыбам, и, таким образом, модуляция рекрутирования и активации Stx17 посредством mAtg8-зависимого механизма, вероятно, произошла позже в эволюции.

    Те же самые молекулярные сущности, участвующие в рекрутировании Stx17 в аутофагосомы, играют роль в последующих регуляторных процессах, ведущих к слиянию аутофагосома-лизосома. На включение Stx17-родственного R-SNARE VAMP8 влияет IRGM. Это дополняет сборку этих SNARE с Q bc -SNARE, завершая четырехспиральный пучок SNARE, продиктованный другими специализированными факторами, включая EPG5 (Wang et al., 2016), PLEKHM1 (McEwan et al., 2015; Nguyen et al., 2016; Wijdeven et al., 2016) и посттрансляционные модификации (Guo et al., 2014).

    Несколько недавних исследований рассматривали роль аппарата конъюгации ATG и mAtg8s в контексте функции Stx17 и их влияния на созревание аутофагосом (Nguyen et al., 2016; Tsuboyama et al., 2016). Цубояма и др. (2016) сообщили, что в клетках с нокаутом Atg3 (KO) образование точек Stx17 было сильно снижено до 30% от уровня клеток WT в дополнение к задержке лизиса внутренней аутофагосомной мембраны и, предположительно, захваченного груза.Наши наблюдения объясняют потерю 70% Stx17 во время созревания аутофагосом в отсутствие аппарата конъюгации Atg. Это подтверждается нашими выводами об отсутствии рекрутирования Stx17 в клетки, экспрессирующие Atg4B C74A , доминантно-отрицательный мутант, секвестрирующий mAtg8s (Fujita et al., 2008). Наши данные не могут объяснить оставшиеся точки Stx17, наблюдаемые Цубояма и др. (2016), но это могло быть результатом присутствия Stx17 на везикулах митохондриального происхождения (McLelland et al., 2016) и, как сообщалось ранее, присутствие Stx17 в сетчатых и митохондриальных профилях (Itakura et al., 2012), его фиксация в гладком ER (Steegmaier et al., 1998, 2000) и дополнительные роли, которые Stx17 может играть на сайтах контакта митохондрий с ЭПР (Hamasaki et al., 2013; Arasaki et al., 2015). В совокупности наши результаты согласуются с ролью mAtg8 в слиянии аутофагосом и лизосом, о чем свидетельствуют значительные задержки созревания в клетках Atg3-KO (Tsuboyama et al., 2016) и отсутствие созревания у мутантов mAtg8-all / hexa-KO. клетки (Nguyen et al., 2016).

    Связывание mAtg8s с доменом SNARE Stx17 постулирует как окклюзию домена SNARE, так и то, что своевременная диссоциация mAtg8s прямо перед четырехспиральным пучком комплексов trans-SNARE должна формироваться для управления слиянием аутофагосома-лизосома. Это может играть регулирующую роль в дополнение к роли mAtg8s в рекрутировании Stx17. Известно, что другие взаимодействия SNARE и связыватели с доменами SNARE играют такие роли.Например, Lürick et al. (2015) показали, что Vps33 комплекса HOPS взаимодействует с Habc доменом Vam7 SNARE у дрожжей, хотя и не с доменом SNARE, чтобы регулировать роль SNAREs в слиянии. Более поздняя работа Бейкера и др. Над Vps33 с Vam3 и Nyv1. (2015) показывают кристаллические структуры частично (но все же не полностью) упорядоченных SNARE-доменов SNAREs с HOPS Vps33 в качестве прелюдии к формированию четырехспирального пучка. Согласно этому исследованию, домены SNARE могут образовывать частично структурированные комплексы с Vps33.Однако эти структуры с HOPS формируются только после того, как SNAREs доставляются в HOPS, тогда как наше исследование предполагает, что взаимодействия Stx17-mAtg8 происходят еще до того, как такие комплексы могут даже сформироваться. Возможно, что HOPS помогает вытеснить mAtg8s из Stx17, чтобы разрешить слияние SNARE, в соответствии с нашим открытием, что нокдаун VPS33A увеличивает ассоциацию LC3B с Stx17.

    Nguyen et al. (2016) обнаружили, что инактивация mAtg8 предотвращает созревание аутофагосом в соответствии с нашими основными выводами и нашими наблюдениями, согласно которым доминантно-отрицательный Atg4B C74A (Fujita et al., 2008), который блокирует липидирование всех mAtg8s, предотвращает рекрутирование Stx17 на мембраны. Мы наблюдали роль Stx17 в защите от внутриклеточных M. tuberculosis. Аутофагическое удаление бактерий и митохондрий сравнивают друг с другом (Deretic, 2010), и существуют экспериментальные доказательства в поддержку общих путей (Manzanillo et al., 2013; Franco et al., 2017). Однако Nguyen et al. (2016) сообщили, что Stx17, по-видимому, не оказывает значительного влияния на деградацию митохондрий в результате аутофагии, хотя это прямо противоречит исследованию Yamashita et al.(2016), но согласуется с исследованием McLelland et al. (2016). Хотя некоторые из систем (например, Паркин) участвуют как в митофагии, так и в ксенофагии (Deretic, 2010; Manzanillo et al., 2013), тем не менее могут быть различия на терминальных стадиях этих путей.

    IRGM напрямую взаимодействует с Stx17. Другие факторы, которые, как сообщается, влияют на слияние аутофагосомы и лизосомы на основе Stx17, обнаруживают некоторое сходство, но также значительно отличаются от IRGM.Напр., Ранее описанный модулятор слияния аутофагосома-лизосома EPG5 не связывается напрямую с Stx17 (Wang et al., 2016). Вместо этого он помогает однажды собранному комплексу Q abc -SNARE (Stx17 – SNAP-29) завершить четырехспиральный пучок SNARE с R-SNAREs VAMP7 / VAMP8, расположенными на эндосомах / лизосомах и усиленными прямыми взаимодействиями EPG5. с VAMP7 / 8. EPG5, как и IRGM, связывается с LC3, но через мотив LIR, и это может помочь соединить аутофагосомы с лизосомами. Однако природа взаимодействий LC3 различна между EPG5 и IRGM, потому что IRGM связывает LC3 и другие mAtg8s независимо от взаимодействия LIR-LDS; эта независимость от LIRs / LDS позволяет IRGM рекрутировать Stx17 непосредственно в аутофагосомы, не мешая взаимодействиям Stx17-LC3.Другой фактор, PLEKHM1 (McEwan et al., 2015), эффектор Rab7 на поздних эндосомальных / лизосомных компартментах, взаимодействует с mAtg8 (аналогично EPG5 через взаимодействия LIR) и обнаруживается в комплексах с Stx17, SNAP-29 и HOPS. PLEKHM1 обладает интересными свойствами, так как он также образует комплексы с Vti1b, другим Q b -SNARE, функция которого в созревании аутофагосом еще не определена (McEwan et al., 2015). Другой эффектор Rab7, действующий из лизосом, RILP, функционирует параллельно с PLEKHM1, причем оба этих эффектора взаимодействуют с эндосомно / лизосомно расположенным HOPS во время аутофагосомно-лизосомного слияния (Wijdeven et al., 2016). Локализация PLEKHM1, RILP и их регулятора Rab7 на лизосомах свидетельствует против того, что они являются прямыми рекрутерами Stx17 в аутофагосомы, а скорее действуют как факторы, обеспечивающие образование и события важных последующих комплексов слияния. Таким образом, IRGM не является дублирующим, а скорее дополняет другие известные специализированные факторы, включая PLEKHM1 (McEwan et al., 2015; Nguyen et al., 2016; Wijdeven et al., 2016) и EPG5 (Wang et al., 2016). Тем не менее, мы не можем исключить существование других альтернативных шаперонов или регуляторов, которые действуют аналогично IRGM, связывая C-концевую область Stx17 и mAtg8s, таким образом рекрутируя Stx17 на возникающие аутофагосомы.Актуальными в этом контексте являются также некоторые филогенетические аспекты LIRs у Stx17 и IRGM во время эволюции. Хотя связанные с иммунитетом GTPases обычно считаются плодовитым семейством белков у позвоночных, низшие виды не всегда могут иметь узнаваемые или аннотированные гомологи. Следовательно, ARP-комплекс на основе IRGM, описанный в нашем исследовании, может быть не единственным рекрутером / шапероном для облегчения доставки Stx17 в аутофагосомы, хотя Caenorhabditis elegans имеет IRGM-подобный белок, EXC-1, до сих пор участвующий только в рециркуляции эндосом (Grussendorf и другие., 2016).

    Роль SNAREs в аутофагосомной системе привлекает все большее внимание, хотя различные участники не однозначно выровнены по четкому пути. Роль SNARE в аутофагии изучалась у дрожжей (Liu et al., 2016), C. elegans (Guo et al., 2014), Drosophila (Takáts et al., 2013, 2014) и млекопитающих (Itakura et al. ., 2012; Diao et al., 2015; Wang et al., 2016). Принципы слияния, катализируемого SNARE, между соединяющимися мембранами путем формирования пучка из четырех спиралей требуют участия одного Q a -SNARE, одного Q bc — или отдельных Q b плюс Q c -SNARE на одном и том же мембрана и один R-SNARE на соединяющейся мембране (Jahn and Scheller, 2006).Множественные SNARE вовлечены в аутофагосомный путь. Это включает образование предшественников аутофагосом, происходящих из плазматической мембраны и эндосомных компартментов: Q a SNARE Stx7, Q b SNARE Vti1b, Q c SNARE Stx8 и R-SNAREs VAMP7 и VAMP8. Как уже было сказано, количество и возможное превышение (с точки зрения спаривания SNARE) SNAREs, как сообщается, играют прямую или косвенную роль в созревании аутофаголизосом: Q a SNAREs Stx7 и Stx17 (Itakura et al., 2012), SNARE Vti1b Q b (Furuta et al., 2010; Itakura et al., 2012; McEwan et al., 2015), SNARE Q bc SNAP-29 (Itakura et al., 2012 ; Diao et al., 2015; Wang et al., 2016) и SNAP-25 (Wang et al., 2016), а также R-SNAREs VAMP7 и VAMP8 (Furuta et al., 2010; Itakura et al., 2012 ; Wang et al., 2016). В секреторной аутофагии, которая завершается не слиянием аутофагических органелл с лизосомами, а процессом, подобным экзоцитозу, задействован совершенно другой набор SNARE: Q a SNAREs Stx3 и Stx4, Q bc -SNAREs SNAP-23 и SNAP-29, а также R-SNARE Sec22b (Kimura et al., 2017). Sec22b и синтаксин 5 также, как сообщается, влияют на способность аутолизосом к деградации, но предполагается, что они имеют косвенные эффекты посредством доставки лизосомальных ферментов через конститутивный секреторный путь (Renna et al., 2011). Более того, у дрожжей участники SNARE в слиянии аутофагосома-вакуоль (единственная дрожжевая лизосома), по-видимому, ориентированы иначе, чем в клетках млекопитающих: дрожжевой R-SNARE (Ykt6) находится на аутофагосоме, а не на поздних эндосомах / лизосомах, как найдены у млекопитающих (например,g., VAMP7 / VAMP8) и Q a — и Q b -SNAREs Vam3 и Vti1 находятся в вакуоли / лизосоме, а не на аутофагосоме (Liu et al., 2016), как обнаружено у млекопитающих (Stx17 ). Эти вариации и очевидные несоответствия требуют дальнейших исследований, поскольку множественные раунды слияния созревающих аутофагосом с лизосомами в клетках млекопитающих могут скрывать начальное спаривание SNARE, обеспечивая при этом последующие раунды слияния, как это наблюдается в клетках млекопитающих (Tsuboyama et al., 2016).

    Таким образом, IRGM и mAtg8 сотрудничают в привлечении Stx17 к аутофагосомам в важных физиологических контекстах, имеющих отношение к туберкулезу и ВИЧ-инфекциям. Система, описанная в этом исследовании, может не только рекрутировать и регулировать Stx17, но также может вносить вклад в циклическое включение и выключение Stx17 аутофагосомных / аутолизосомных органелл, феномен, который уже наблюдается (Itakura et al., 2012). Мы прогнозируем, что отношения, выявленные в этом исследовании, представляют собой цикл, зависимый от липидирования IRGM GTPase и LC3, и, вероятно, включают дополнительные входные сигналы от вышестоящих датчиков и регуляторов.Мы видим IRGM и mAtg8 в качестве исполнителей таких сигнальных входов, которые как рекрутируют, так и изолируют Stx17 и оставляют недоступным или доступным домен SNARE Stx17 по мере необходимости для спаривания с другими SNARE. Расположение двух LIR Stx17s так, чтобы они перекрывались с его доменом SNARE, является стратегическим положением, делая его открытым для образования четырехспиральных комплексов SNARE при доставке к подходящим мембранам и при соответствующих входных сигналах.

    Визуализацию и анализ

    SR выполняли, как описано ранее (Kimura et al., 2017). Клетки HeLa помещали на 25-миллиметровые круглые покровные стекла № 1.5 (Warner Instruments) и оставляли на ночь. После фиксации клетки инкубировали с антителом против кроличьего LC3 в течение ночи и промывали PBS с последующим мечения с помощью Alexa Fluor 647 (A21245; Invitrogen). Покровное стекло помещали в камеру для клеток Attofluor (A-7816; Thermo Fisher Scientific) с 1,1 мл буфера для визуализации. Буфер для визуализации состоял из ферментативной кислородно-поглощающей системы и первичного тиола: 50 мМ Трис, 10 мМ NaCl, 10% (мас. / Об.) Глюкозы, 168.8 Ед / мл глюкозооксидазы (G2133; Sigma-Aldrich), 1404 Ед / мл каталазы (C9332; Sigma-Aldrich) и 20 мМ 2-аминоэтантиола, pH 8. Камеру герметично закрывали, помещая дополнительное покровное стекло поверх камеры. и реакции поглощения кислорода позволяли протекать в течение 20 минут при комнатной температуре перед началом визуализации. Визуализацию выполняли с использованием специально созданного микроскопа под управлением специально написанного программного обеспечения в MATLAB (MathWorks). Камера sCMOS (C11440-22CU; Hamamatsu Photonics) использовалась для сбора данных SR, а вторая камера (DMK 31AU03; Imaging Source) использовалась для активной стабилизации (McGorty et al., 2013). Лазер с длиной волны 647 нм (500 мВт 2RU-VFL-P; MPB Communications Inc.) использовался в качестве лазера возбуждения, а лазер с длиной волны 405 нм (40 мВт-DL5146-101S; Thorlabs) использовался для ускорения темноты до -флуоресцентный переход. Объектив имел числовую апертуру 1,49 (APON 60 × OTIRF; Olympus), а фильтры состояли из фильтра 835/70 нм (FF01-835 / 70-25; Semrock) для тракта излучения инфракрасной стабилизации, 708 / 75- нм фильтр (FF01-708 / 75-25; Semrock) для тракта излучения SR изображения и очищающий фильтр лазерного диода 640/8 нм (LD01-640 / 8-12.5; Семрок). При отображении первой метки (LC3) было получено и сохранено эталонное изображение светлого поля для каждой целевой клетки. Во время сбора данных использовался 647-нм лазер при ∼15 кВт / см 2 для получения восьми наборов из 5000 кадров (всего 40 000) при 100 Гц. После того, как краситель был фотообесцвечен и затем гашен NaBH 4 , как описано ранее (Valley et al., 2015), GFP-Stx17 был помечен, сначала блокируя клетку усилителем сигнала (136933; Molecular Probes; Thermo Fisher Scientific) в течение 30 минут. мин с последующим изменением метки GFP-связывающим белком (A31852; Thermo Fisher Scientific), конъюгированным с Alexa Fluor 647 в концентрации 10 мкг / мл в течение 1 часа.Для второго раунда визуализации каждая ячейка была перестроена с использованием сохраненного эталонного изображения светлого поля, как описано ранее (Valley et al., 2015). Данные были проанализированы с помощью алгоритма 2D-локализации, основанного на оценке максимального правдоподобия (Smith et al., 2010). Локализованные излучатели были отфильтрованы через пороговые значения максимального количества фоновых фотонов 200, минимального количества фотонов на кадр на излучатель 250 и минимального значения p 0,01. Принятые излучатели использовались для восстановления изображения СИ.Каждый излучатель был представлен двумерной функцией Гаусса с σ x и σ y , равными точности локализации, которые были рассчитаны на основе нижней границы Крамера-Рао (CRLB). Кластерный анализ был выполнен с помощью кода MATLAB с использованием инструментов кластеризации (http://stmc.health.unm.edu/tools-and-data/). 28 областей интереса (ROI) были выбраны из изображения. Затем кластеризация выполнялась отдельно для каждой метки в каждой области интереса с использованием алгоритма DBSCAN на основе плотности (Daszykowski et al., 2001), выбирая максимальное расстояние до ближайшего соседа 40 нм и требуя, чтобы кластеры содержали не менее 10 наблюдений. Во всех случаях подавляющее большинство наблюдений для каждой метки в каждой области интереса составляли единый кластер. Границы кластера создавались с помощью функции «граница» MATLAB, из которой вычислялись области кластера. Наконец, в таблицу были занесены межцентровые расстояния между центроидами кластеров LC3 и GFP-Stx17 на ROI.

    Мембранное фракционирование выполняли, как описано ранее (Ge et al., 2013). Клетки HEK293T (10 чашек на образец) помещали в чашки диаметром 10 см и обрабатывали pp242 в присутствии бафиломицина A1. Для последовательного центрифугирования клетки собирали и осадок ресуспендировали в 2,7-кратном объеме осадка клеток в буфере B1 (20 мМ Hepes-KOH, pH 7,2, 400 мМ сахарозы и 1 мМ EDTA), содержащем ингибиторы протеаз и фосфатаз (Roche). и 0,3 мМ DTT, а затем гомогенизировали, пропуская через иглу 22-G, до достижения лизиса 85–90% (анализ окрашиванием трипановым синим).Гомогенаты подвергали последовательному дифференциальному центрифугированию при 3000 g в течение 10 минут, 25000 g в течение 20 минут и 100000 g в течение 30 минут для сбора гранулированных мембран (3K, 25K и 100K соответственно) с использованием ротора TLA100.3 (Beckman Coulter ) и полипропиленовая трубка. Осадки суспендировали в буфере B88 (20 мМ Hepes, pH 7,2, 150 мМ ацетат калия, 5 мМ ацетат магния и 250 мМ сорбитол). Добавляли 5-кратный загрузочный буфер SDS, образцы кипятили в течение 5 минут и анализировали иммуноблоттингом.Дальнейшее фракционирование с использованием мембранной флотации в ступенчатом градиенте сахарозы с последующим центрифугированием в ступенчатых градиентах OptiPrep было выполнено, как описано ранее (Ge et al., 2013). Для этого гранулы мембраны 25K суспендировали в 0,75 мл 1,25 М сахарозного буфера и покрывали 0,5 мл 1,1 М и 0,5 мл 0,25 М сахарозного буфера с последующим центрифугированием при 120 000 g в течение 2 часов; затем границу раздела между 0,25 М и 1,1 М сахарозой (L фракция) суспендировали в 1 мл 19% OptiPrep для ступенчатого градиента, содержащего 0.5 мл 22,5%, 1 мл 19% (образец), 0,9 мл 16%, 0,9 мл 12%, 1 мл 8%, 0,5 мл 5% и 0,2 мл 0% OptiPrep каждый. Градиент OptiPrep центрифугировали при 150000 g в течение 3 часов, а затем сверху собирали восемь фракций по 0,5 мл каждая. Фракции разбавляли буфером B88, и мембраны собирали центрифугированием при 100000 g в течение 1 часа. Образцы подвергали SDS-PAGE и вестерн-блоттингу на Stx17, IRGM, LC3B, LAMP2 и GM130, как описано в следующем разделе.